| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 缩略词 | 第14-15页 |
| 1 引言 | 第15-23页 |
| 1.1 死体营养菌 | 第15-17页 |
| 1.1.1 核盘菌 | 第15-16页 |
| 1.1.1.1 菌核 | 第15-16页 |
| 1.1.1.2 核盘菌致病机理 | 第16页 |
| 1.1.2 由核盘菌引起的菌核病 | 第16-17页 |
| 1.2 植物中的活性氧 | 第17-21页 |
| 1.2.1 植物中活性氧ROS的产生 | 第17页 |
| 1.2.2 植物中活性氧ROS的清除 | 第17-20页 |
| 1.2.2.1 ROS清除酶抗氧化系统 | 第18-20页 |
| 1.2.2.2 ROS清除非酶抗氧化系统 | 第20页 |
| 1.2.3 植物中活性氧ROS的双重功能 | 第20页 |
| 1.2.4 活性氧ROS在植物抗病中的作用 | 第20-21页 |
| 1.3 植物细胞程序性死亡 | 第21-22页 |
| 1.4 拟南芥 | 第22-23页 |
| 1.4.1 拟南芥的分子生物学研究策略 | 第22页 |
| 1.4.2 拟南芥的抗病信号传导途径 | 第22-23页 |
| 1.5 研究意义 | 第23页 |
| 2 实验材料与方法 | 第23-36页 |
| 2.1 材料 | 第23-25页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 菌株 | 第23页 |
| 2.1.3 载体 | 第23-24页 |
| 2.1.4 试剂 | 第24页 |
| 2.1.5 培养基及试剂配方 | 第24-25页 |
| 2.1.6 引物设计 | 第25页 |
| 2.2 实验方法与实验步骤 | 第25-36页 |
| 2.2.1 大肠杆菌DH5α感受态细胞的制备 | 第25页 |
| 2.2.2 农杆菌感受态的制备 | 第25-26页 |
| 2.2.3 拟南芥的种植 | 第26页 |
| 2.2.4 拟南芥total RNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.5 cDNA的合成 | 第27-28页 |
| 2.2.6 过表达载体的构建 | 第28-31页 |
| 2.2.6.1 目的基因片段的扩增 | 第28-29页 |
| 2.2.6.2 胶回收目的基因片段的TA克隆 | 第29页 |
| 2.2.6.3 连接产物转化大肠杆菌DH5α感受态细胞 | 第29-30页 |
| 2.2.6.4 重组克隆子的鉴定及测序 | 第30页 |
| 2.2.6.5 测序序列比对正确的阳性克隆子的质粒提取 | 第30-31页 |
| 2.2.6.6 构建过表达载体 | 第31页 |
| 2.2.7 过表达载体转化农杆菌感受态与阳性重组子验证 | 第31-32页 |
| 2.2.8 农杆菌浸花转化拟南芥 | 第32页 |
| 2.2.9 转基因植株的筛选 | 第32页 |
| 2.2.10 拟南芥DNA的提取 | 第32-33页 |
| 2.2.11 阳性转基因植株的PCR验证 | 第33页 |
| 2.2.12 过表达转基因拟南芥纯合体的筛选 | 第33页 |
| 2.2.13 T-DNA插入失活突变体的验证 | 第33-34页 |
| 2.2.14 实时荧光定量PCR | 第34-35页 |
| 2.2.15 抗菌核病表型分析 | 第35页 |
| 2.2.15.1 核盘菌培养 | 第35页 |
| 2.2.15.2 核盘菌接种离体叶片 | 第35页 |
| 2.2.15.3 核盘菌活体接种拟南芥叶片 | 第35页 |
| 2.2.16 拟南芥叶片组织染色 | 第35-36页 |
| 2.2.16.1 DAB染色 | 第36页 |
| 2.2.16.2 台盼蓝染色 | 第36页 |
| 3 结果与分析 | 第36-69页 |
| 3.1 预测的参与菌核病抗性调控基因表达量的实时荧光定量PCR分析 | 第36-37页 |
| 3.2 过表达载体的构建 | 第37-39页 |
| 3.2.1 At3g52400过表达载体的构建 | 第38-39页 |
| 3.2.2 At4g12720过表达载体的构建 | 第39页 |
| 3.3 转基因过表达植株的筛选与验证 | 第39-40页 |
| 3.4 过表达转基因纯合体的表达量分析 | 第40-41页 |
| 3.5 T-DNA插入失活突变体纯合体植株的验证 | 第41-43页 |
| 3.5.1 SALK_082482的验证 | 第41-42页 |
| 3.5.2 SALK_008617的验证 | 第42页 |
| 3.5.3 SALK_071917的验证 | 第42-43页 |
| 3.5.4 SALK_068300的验证 | 第43页 |
| 3.6 基因功能分析 | 第43-69页 |
| 3.6.1 At4g13180调控拟南芥抗菌核病的功能分析 | 第44-47页 |
| 3.6.1.1 At4g13180过表达转基因拟南芥的抗病性分析 | 第44-46页 |
| 3.6.1.2 At4g13180过表达转基因拟南芥纯合体在接种核盘菌后的活性氧检测及菌丝生长情况分析 | 第46-47页 |
| 3.6.2 At2g30870调控拟南芥抗菌核病的功能研究 | 第47-52页 |
| 3.6.2.1 At2g30870过表达转基因拟南芥和T-DNA插入失活突变体的抗/感病性分析 | 第47-51页 |
| 3.6.2.2 在接种核盘菌后At2g30870对活性氧及菌丝生长的调控分析 | 第51-52页 |
| 3.6.3 At3g52400调控拟南芥抗菌核病的功能分析 | 第52-59页 |
| 3.6.3.1 At3g52400过表达转基因拟南芥和T-DNA插入失活突变体的抗/感病性分析 | 第52-55页 |
| 3.6.3.2 At3g52400对活性氧及菌丝生长的调控分析 | 第55-56页 |
| 3.6.3.3 At3g52400对防御相关基因表达量的调控分析 | 第56-59页 |
| 3.6.4 At4g24220调控拟南芥抗菌核病的功能分析 | 第59-67页 |
| 3.6.4.1 At4g24220过表达转基因拟南芥和T-DNA插入失活突变体的抗/感病性分析 | 第60-62页 |
| 3.6.4.2 At4g24220对活性氧及菌丝生长情况的调控分析 | 第62-63页 |
| 3.6.4.3 At4g24220对防御相关基因表达量的调控分析 | 第63-67页 |
| 3.6.5 At4g12720调控拟南芥抗菌核病的功能分析 | 第67-69页 |
| 3.6.5.1 At4g24220过表达转基因拟南芥的抗病性分析 | 第67-69页 |
| 3.6.5.2 At4g12720对活性氧及菌丝生长的调控分析 | 第69页 |
| 4 小结和讨论 | 第69-76页 |
| 4.1 实验小结与讨论 | 第69-75页 |
| 4.1.1 At4g13180在拟南芥抗菌核病的作用 | 第70-71页 |
| 4.1.2 At2g30870基因在拟南芥抗菌核病的作用 | 第71-72页 |
| 4.1.3 At3g52400基因在拟南芥抗菌核病的作用 | 第72-73页 |
| 4.1.4 At4g24220基因在拟南芥抗菌核病的作用 | 第73-74页 |
| 4.1.5 At4g12720基因在拟南芥抗菌核病的作用 | 第74-75页 |
| 4.2 实验中存在的问题 | 第75-76页 |
| 5 展望 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 附录 | 第83-88页 |
| 致谢 | 第88页 |
