| 中文摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第15-21页 |
| 1.1 肿瘤细胞的能量代谢 | 第15-16页 |
| 1.1.1 肿瘤细胞以有氧糖酵解为主要供能方式 | 第15页 |
| 1.1.2 线粒体代谢以谷氨酰胺为底物 | 第15-16页 |
| 1.2 线粒体 | 第16-17页 |
| 1.2.1 线粒体结构和功能 | 第16页 |
| 1.2.2 线粒体前体蛋白 | 第16-17页 |
| 1.3 抗肿瘤治疗与线粒体 | 第17-18页 |
| 1.3.1 线粒体能量代谢中潜在的靶点 | 第17-18页 |
| 1.3.2 线粒体中潜在的靶点 | 第18页 |
| 1.4 重组荞麦胰蛋白酶抑制剂 | 第18-20页 |
| 1.5 研究目的与意义 | 第20-21页 |
| 第二章 rBTI对HKII表达的影响 | 第21-31页 |
| 2.1 引言 | 第21页 |
| 2.2 实验材料、试剂及仪器 | 第21页 |
| 2.3 实验方法 | 第21-25页 |
| 2.3.1 细胞培养 | 第21页 |
| 2.3.2 MTT检测 | 第21-22页 |
| 2.3.3 ATP含量测定 | 第22页 |
| 2.3.4 总RNA提取及qRT-PCR | 第22-23页 |
| 2.3.5 细胞总蛋白、线粒体蛋白提取 | 第23-24页 |
| 2.3.6 WesternBlot检测HKII的变化 | 第24页 |
| 2.3.7 免疫荧光分析 | 第24页 |
| 2.3.8 HK活性测定 | 第24-25页 |
| 2.3.9 统计学分析 | 第25页 |
| 2.4 实验结果 | 第25-29页 |
| 2.4.1 rBTI抑制HepG2细胞增值 | 第25页 |
| 2.4.2 rBTI对糖酵解相关酶的影响 | 第25-26页 |
| 2.4.3 rBTI下调HKII表达 | 第26-27页 |
| 2.4.4 rBTI减少HKII在线粒体的定位 | 第27-28页 |
| 2.4.5 rBTI对HK活性的影响 | 第28-29页 |
| 2.4.6 rBTI对ATP含量的影响 | 第29页 |
| 2.5 讨论 | 第29-31页 |
| 第三章 rBTI螺旋区的正电荷氨基酸的突变 | 第31-37页 |
| 3.1 引言 | 第31页 |
| 3.2 实验材料、试剂及仪器 | 第31页 |
| 3.3 实验方法 | 第31-33页 |
| 3.3.1 rBTI突变质粒的构建 | 第31-32页 |
| 3.3.2 突变体的原核表达及纯化 | 第32页 |
| 3.3.3 胰蛋白酶抑制活性分析 | 第32页 |
| 3.3.4 抑制剂的动力学分析 | 第32页 |
| 3.3.5 抑制剂的圆二色谱分析 | 第32-33页 |
| 3.4 实验结果 | 第33-35页 |
| 3.4.1 rBTI及其突变体的表达纯化 | 第33页 |
| 3.4.2 rBTI及其突变体的抑制活性分析 | 第33-34页 |
| 3.4.3 rBTI及其突变体的抑制常数 | 第34-35页 |
| 3.4.4 rBTI及其突变体的圆二色谱分析 | 第35页 |
| 3.5 讨论 | 第35-37页 |
| 第四章 rBTI螺旋区突变体对HepG2细胞增殖的影响 | 第37-45页 |
| 4.1 引言 | 第37页 |
| 4.2 实验材料、试剂及仪器 | 第37页 |
| 4.3 实验方法 | 第37-38页 |
| 4.3.1 MTT实验 | 第37页 |
| 4.3.2 细胞形态 | 第37页 |
| 4.3.3 线粒体形态 | 第37-38页 |
| 4.3.4 ATP含量测定 | 第38页 |
| 4.3.5 WesternBlot检测HKII的变化 | 第38页 |
| 4.4 实验结果 | 第38-41页 |
| 4.4.1 rBTI及其突变体对细胞增殖的影响 | 第38-39页 |
| 4.4.2 rBTI及其突变体对细胞形态的影响 | 第39页 |
| 4.4.3 rBTI及其突变体对线粒体形态的影响 | 第39-40页 |
| 4.4.4 rBTI及其突变体对ATP含量的影响 | 第40-41页 |
| 4.4.5 WesternBlot检测HKII的变化 | 第41页 |
| 4.5 讨论 | 第41-45页 |
| 小结与展望 | 第45-47页 |
| 参考文献 | 第47-53页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第53-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 个人简介及联系方式 | 第55-58页 |
