| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 缩略词对照表 | 第12-14页 |
| 1 绪论 | 第14-34页 |
| 1.1 中枢神经系统促进哺乳动物生殖功能的相关研究 | 第15-19页 |
| 1.1.1 Kisspeptin/GPR54对哺乳动物生殖的作用 | 第15-17页 |
| 1.1.2 GnRH对哺乳动物生殖功能的作用 | 第17-19页 |
| 1.1.3 下丘脑其他神经肽间接调控GnRH的分泌 | 第19页 |
| 1.2 RFRP-3抑制哺乳动物生殖功能的相关研究 | 第19-30页 |
| 1.2.1 RFRP-3及其同源物的保守性 | 第19-21页 |
| 1.2.2 RFRP-3的表达定位及神经元与纤维网络分布 | 第21-22页 |
| 1.2.3 RFRP-3神经肽对哺乳动物生殖功能调控的研究进展 | 第22-26页 |
| 1.2.4 RFRP-3神经肽对哺乳动物青春期发育调控的研究进展 | 第26-28页 |
| 1.2.5 RFRP-3神经肽作用细胞内信号通路的研究进展 | 第28-30页 |
| 1.3 课题立题依据与研究意义 | 第30页 |
| 1.4 课题研究目的与内容 | 第30-32页 |
| 1.4.1 研究目的 | 第30-31页 |
| 1.4.2 研究内容 | 第31-32页 |
| 1.5 课题创新点 | 第32-33页 |
| 1.6 技术路线 | 第33-34页 |
| 2 RFRP-3对小鼠青春期发育及启动的影响 | 第34-70页 |
| 2.1 实验材料、试剂及仪器 | 第34-38页 |
| 2.1.1 实验动物与饲养管理 | 第34页 |
| 2.1.2 主要实验试剂与耗材 | 第34-36页 |
| 2.1.3 主要实验仪器 | 第36-37页 |
| 2.1.4 实验用部分溶液及其配制方法 | 第37-38页 |
| 2.2 实验方法及步骤 | 第38-51页 |
| 2.2.1 小鼠分组与处理 | 第38-39页 |
| 2.2.2 小鼠体重的测定 | 第39页 |
| 2.2.3 血清采样 | 第39页 |
| 2.2.4 ELISA检测血清相关蛋白的浓度 | 第39-40页 |
| 2.2.5 小鼠下丘脑相关基因表达量的检测 | 第40-44页 |
| 2.2.6 免疫组织化学 | 第44-45页 |
| 2.2.7 感受态制备 | 第45-46页 |
| 2.2.8 质粒构建 | 第46-48页 |
| 2.2.9 内毒素去除 | 第48-49页 |
| 2.2.10 慢病毒包装 | 第49-51页 |
| 2.2.11 小鼠手术处理 | 第51页 |
| 2.2.12 结果分析 | 第51页 |
| 2.3 实验结果 | 第51-65页 |
| 2.3.1 发育过程中下丘脑RFRP基因表达模式及生殖激素分泌模式 | 第52-54页 |
| 2.3.2 RFRP-3对青春期前期雌性小鼠生殖发育的调节 | 第54-57页 |
| 2.3.3 过表达RFRF-3基因对青春期启动的影响 | 第57-65页 |
| 2.4 讨论 | 第65-68页 |
| 2.5 本章小结 | 第68-70页 |
| 3 RFRP-3对促性腺激素抑制作用的分子机制的研究 | 第70-92页 |
| 3.1 实验材料、试剂及仪器 | 第70-72页 |
| 3.1.1 实验细胞株 | 第70页 |
| 3.1.2 主要实验试剂与耗材 | 第70-72页 |
| 3.1.3 主要实验仪器 | 第72页 |
| 3.1.4 实验中主要试剂配制 | 第72页 |
| 3.2 实验方法 | 第72-80页 |
| 3.2.1 细胞复苏、培养、传代、种板和冻存 | 第72-73页 |
| 3.2.2 细胞总RNA提取 | 第73-74页 |
| 3.2.3 反转录与实时荧光定量PCR | 第74页 |
| 3.2.4 质粒构建及提取 | 第74页 |
| 3.2.5 质粒内毒素去除 | 第74页 |
| 3.2.6 过表达质粒转染 | 第74-75页 |
| 3.2.7 细胞激素或拮抗剂处理 | 第75页 |
| 3.2.8 ELISA检测培养基中蛋白水平 | 第75页 |
| 3.2.9 WesternBlot分析蛋白表达 | 第75-78页 |
| 3.2.10 GEO数据库及生物信息学分析 | 第78-79页 |
| 3.2.11 数据统计与分析 | 第79-80页 |
| 3.3 实验结果 | 第80-89页 |
| 3.3.1 RFRP-3对基底的促性腺激素的影响 | 第80-81页 |
| 3.3.2 RFRP-3对GnRH诱导的促性腺激素的影响 | 第81-83页 |
| 3.3.3 生物信息学分析GnRH调控促性腺激素分泌的机制 | 第83-87页 |
| 3.3.4 RFRP-3调控GnRH诱导的促性腺激素分泌的信号途径 | 第87-89页 |
| 3.4 讨论 | 第89-91页 |
| 3.5 小结 | 第91-92页 |
| 4 RFRP-3调控GnRH合成与分泌分子机制的探究 | 第92-130页 |
| 4.1 实验材料、试剂及仪器 | 第92-93页 |
| 4.1.1 实验细胞株 | 第92-93页 |
| 4.1.2 主要实验试剂与耗材 | 第93页 |
| 4.1.3 主要实验仪器 | 第93页 |
| 4.1.4 实验中主要试剂配制 | 第93页 |
| 4.2 实验方法 | 第93-98页 |
| 4.2.1 细胞复苏、培养、传代、种板和冻存 | 第93页 |
| 4.2.2 细胞总RNA提取 | 第93页 |
| 4.2.3 反转录与实时荧光定量PCR | 第93页 |
| 4.2.4 质粒构建及提取 | 第93页 |
| 4.2.5 质粒内毒素去除 | 第93页 |
| 4.2.6 慢病毒包装及浓缩 | 第93-94页 |
| 4.2.7 质粒转染 | 第94页 |
| 4.2.8 细胞激素或拮抗剂处理 | 第94页 |
| 4.2.9 ELISA检测培养基中蛋白水平 | 第94页 |
| 4.2.10 WesternBlot分析蛋白表达 | 第94页 |
| 4.2.11 细胞免疫荧光 | 第94页 |
| 4.2.12 流式细胞技术 | 第94-95页 |
| 4.2.13 转录组高通量测序及分析 | 第95-98页 |
| 4.2.14 数据统计与分析 | 第98页 |
| 4.3 实验结果 | 第98-127页 |
| 4.3.1 RFRP-3对GT1-7细胞中GnRH表达的影响 | 第98-104页 |
| 4.3.2 高通量测序及RFRP-3应激相关基因的筛选 | 第104-107页 |
| 4.3.3 差异表达基因的生物信息学分析 | 第107-117页 |
| 4.3.4 外源性RFRP-3抑制GnRH表达信号机制的验证 | 第117-118页 |
| 4.3.5 过表达RFRP-3对GnRH表达信号机制的验证 | 第118-122页 |
| 4.3.6 RFRP-3调控GnRH表达信号通路与雌激素信号通路相互作用关系 | 第122-127页 |
| 4.4 讨论 | 第127-129页 |
| 4.5 小结 | 第129-130页 |
| 5 结论与展望 | 第130-134页 |
| 5.1 主要结论 | 第130-131页 |
| 5.2 后续研究展望 | 第131-134页 |
| 致谢 | 第134-136页 |
| 参考文献 | 第136-148页 |
| 附录 | 第148页 |
| A 作者在攻读学位期间发表的论文目录 | 第148页 |
| B 作者在攻读学位期间参加科研项目情况: | 第148页 |
