桃潜隐花叶类病毒茎环结构变异对复制及转运影响的研究
| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 1 绪论 | 第10-16页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 类病毒 | 第10-11页 |
| 1.2.1 类病毒的结构 | 第10页 |
| 1.2.2 类病毒的分类 | 第10-11页 |
| 1.3 桃潜隐花叶类病毒的研究概况 | 第11-12页 |
| 1.4 类病毒检测方法 | 第12-14页 |
| 1.4.1 生物学检测法 | 第12-13页 |
| 1.4.2 分子检测法 | 第13-14页 |
| 1.5 类病毒转运 | 第14-15页 |
| 1.6 本研究的意义 | 第15-16页 |
| 2 桃潜隐花叶类病毒的分子检测 | 第16-25页 |
| 2.1 实验材料 | 第16-17页 |
| 2.1.1 引物设计与合成 | 第16页 |
| 2.1.2 培养基和其他试剂 | 第16页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第16-17页 |
| 2.2 实验方法 | 第17-21页 |
| 2.2.1 桃叶片总RNA的提取 | 第17页 |
| 2.2.2 第一链cDNA的合成 | 第17-18页 |
| 2.2.3 PCR反应 | 第18页 |
| 2.2.4 琼脂糖凝胶电泳 | 第18-19页 |
| 2.2.5 PCR产物的纯化 | 第19页 |
| 2.2.6 DNA的克隆与鉴定 | 第19-21页 |
| 2.2.7 质粒的测序及序列分析 | 第21页 |
| 2.3 结果与分析 | 第21-23页 |
| 2.3.1 总RNA提取 | 第21页 |
| 2.3.2 桃潜隐花叶类病毒RT-PCR扩增结果 | 第21-22页 |
| 2.3.3 PCR产物的纯化 | 第22页 |
| 2.3.4 桃潜隐花叶类病毒序列比对与分析 | 第22-23页 |
| 2.4 讨论 | 第23-24页 |
| 2.5 本章小结 | 第24-25页 |
| 3 桃潜隐花叶类病毒闭环突变体的制备以及体外转录 | 第25-33页 |
| 3.1 实验材料 | 第25-26页 |
| 3.1.1 质粒和菌株 | 第25页 |
| 3.1.2 突变引物设计与合成 | 第25-26页 |
| 3.1.3 突变质粒的合成 | 第26页 |
| 3.2 仪器和试剂 | 第26页 |
| 3.2.1 主要仪器 | 第26页 |
| 3.2.2 其他试剂 | 第26页 |
| 3.3 实验方法 | 第26-29页 |
| 3.3.1 桃潜隐花叶类病毒突变体的制备 | 第26-28页 |
| 3.3.2 体外转录 | 第28-29页 |
| 3.4 结果与分析 | 第29-31页 |
| 3.4.1 桃潜隐花叶类病毒不同突变体 | 第29-31页 |
| 3.4.2 体外转录闭环质粒 | 第31页 |
| 3.5 讨论 | 第31-32页 |
| 3.6 本章小结 | 第32-33页 |
| 4 桃潜隐花叶类病毒的组织定位及复制分析 | 第33-44页 |
| 4.1 实验材料 | 第33页 |
| 4.2 仪器和试剂 | 第33-34页 |
| 4.2.1 主要仪器 | 第33页 |
| 4.2.2 其他试剂 | 第33-34页 |
| 4.3 实验方法 | 第34-39页 |
| 4.3.1 接种烟草 | 第34页 |
| 4.3.2 原位杂交检测 | 第34-37页 |
| 4.3.3 全组织原位杂交 | 第37页 |
| 4.3.4 原生质体制备 | 第37页 |
| 4.3.5 荧光定量PCR检测 | 第37-39页 |
| 4.4 结果与分析 | 第39-43页 |
| 4.4.1 探针质量分析 | 第39页 |
| 4.4.2 实时定量RT-PCR检测结果 | 第39-40页 |
| 4.4.3 原位杂交结果 | 第40-43页 |
| 4.5 本章小结 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-49页 |
| 附录1 | 第49-50页 |
| 附录2 | 第50-59页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
