| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-31页 |
| 1.1 病毒对植物光合作用的影响 | 第12-14页 |
| 1.2 病毒蛋白与植物蛋白的互作研究 | 第14-23页 |
| 1.2.1 马铃薯Y病毒属 | 第14-16页 |
| 1.2.2 病毒外壳蛋白CP的研究进展 | 第16-19页 |
| 1.2.3 辅助成分蛋白酶HC-Pro的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.3 叶绿体ATP合酶的研究进展 | 第23-27页 |
| 1.3.1 叶绿体ATP合酶的亚基组成 | 第23-24页 |
| 1.3.2 ATP合酶的催化机制 | 第24-25页 |
| 1.3.3 叶绿体ATP合酶的组装及其在光合作用调节中的重要功能 | 第25-27页 |
| 1.4 叶绿体分裂蛋白的研究进展 | 第27-29页 |
| 1.4.1 叶绿体分裂机制 | 第27-29页 |
| 1.4.2 叶绿体分裂调控蛋白MinD的结构与功能 | 第29页 |
| 1.5 本论文研究目的和意义 | 第29-31页 |
| 第二章 材料与方法 | 第31-54页 |
| 2.1 实验材料 | 第31-34页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第31页 |
| 2.1.2 菌种及载体 | 第31页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第31-32页 |
| 2.1.4 基本培养基配制 | 第32-33页 |
| 2.1.5 本研究所用引物列表 | 第33-34页 |
| 2.2 实验方法 | 第34-54页 |
| 2.2.1 植物总DNA的提取(CTAB法) | 第34页 |
| 2.2.2 植物总RNA的提取(TRIzol法)及反转录 | 第34-36页 |
| 2.2.3 重组克隆的构建 | 第36-38页 |
| 2.2.4 马铃薯Y病毒接毒实验(机械接毒法) | 第38页 |
| 2.2.5 烟草光合速率测定(LI-6400 XT便携式光合仪) | 第38-39页 |
| 2.2.6 大肠杆菌质粒大提及纯化(威格拉斯质粒大量提取纯化试剂盒) | 第39-40页 |
| 2.2.7 拟南芥原生质体转化 | 第40页 |
| 2.2.8 烟草的遗传转化 | 第40-42页 |
| 2.2.9 植物总蛋白的提取 | 第42页 |
| 2.2.10 融合MBP标签蛋的原核表达和纯化 | 第42-43页 |
| 2.2.11 融合GST标签蛋白的原核表达和纯化 | 第43-44页 |
| 2.2.12 融合His标签蛋白的原核表达和纯化 | 第44页 |
| 2.2.13 GST Pull-down实验 | 第44-45页 |
| 2.2.14 植物叶绿体提取(Sigma CP-ISO叶绿体提取试剂盒) | 第45-46页 |
| 2.2.15 植物叶绿体蛋白提取 | 第46页 |
| 2.2.16 抗体制备 | 第46页 |
| 2.2.17 免疫共沉淀(Co-IP)实验 | 第46-47页 |
| 2.2.18 蛋白Western杂交 | 第47-48页 |
| 2.2.19 菠菜ATP合酶CF_1复合体的制备及其酶活性检测 | 第48-49页 |
| 2.2.20 菠菜类囊体膜提取及ATP合酶合成活性检测 | 第49-50页 |
| 2.2.21 烟草叶绿体ATP合酶的免疫金标实验 | 第50-51页 |
| 2.2.22 烟草叶绿体分裂蛋白NtMinD的ATP酶活性检测 | 第51页 |
| 2.2.23 酵母共转化及互作验证 | 第51-52页 |
| 2.2.24 酵母质粒提取(天根生化酵母提取试剂盒) | 第52-53页 |
| 2.2.25 叶绿体的显微观察 | 第53-54页 |
| 第三章 PVY CP与NtCF_1-β亚基互作降低ATP合酶含量 | 第54-68页 |
| 3.1 马铃薯Y病毒感染导致烟草光合速率下降 | 第54-56页 |
| 3.1.1 马铃薯Y病毒感染烟草的症状 | 第54页 |
| 3.1.2 病毒蛋白在叶绿体中的积累 | 第54-55页 |
| 3.1.3 PVY接毒烟草的光合速率下降 | 第55-56页 |
| 3.2 CP转基因烟草的光合速率下降 | 第56-59页 |
| 3.2.1 二磷酸核酮糖羧化酶小亚基引导肽功能的验证 | 第56-57页 |
| 3.2.2 CP转基因烟草的光合速率下降 | 第57-59页 |
| 3.3 马铃薯Y病毒CP蛋白与NtCF_1β亚基互作的验证 | 第59-62页 |
| 3.3.1 Pull-down实验验证PVY CP蛋白与NtCF_1β亚基的互作 | 第59-60页 |
| 3.3.2 Co-IP实验验证PVY CP蛋白与NtCF_1β亚基在转基因烟草叶绿体中的互作 | 第60-61页 |
| 3.3.3 Co-IP实验验证PVY CP蛋白与NtCF_1β亚基在病毒感染烟草叶绿体中的互作 | 第61-62页 |
| 3.4 CP与NtCF_1β亚基互作对ATP合酶活性的影响 | 第62-63页 |
| 3.4.1 CP蛋白对ATP合酶水解活性的影响 | 第62-63页 |
| 3.4.2 CP蛋白对ATP合酶合成活性的影响 | 第63页 |
| 3.5 CP与NtCF_1β亚基互作对ATP合酶含量的影响 | 第63-68页 |
| 3.5.1 CP转基因烟草的ATP合酶数量降低 | 第64-66页 |
| 3.5.2 PVY接毒烟草的ATP合酶数量降低 | 第66-68页 |
| 第四章 PVY HC-Pro与NtCF_1-β亚基互作降低ATP合酶含量 | 第68-77页 |
| 4.1 HC-Pro转基因烟草光合速率下降 | 第68-70页 |
| 4.1.1 Rubisco小亚基引导肽的功能验证 | 第68-69页 |
| 4.1.2 HC-Pro转基因烟草的光合速率下降 | 第69-70页 |
| 4.2 马铃薯Y病毒HC-Pro蛋白与NtCF_1β亚基互作的验证 | 第70-72页 |
| 4.2.1 Pull-down实验验证PVY HC-Pro蛋白与NtCF_1β亚基的互作 | 第71-72页 |
| 4.2.2 Co-IP实验验证PVY HC-Pro蛋白与NtCF_1β亚基的互作 | 第72页 |
| 4.3 HC-Pro与NtCF_1β亚基互作对ATP合酶活性与含量的影响 | 第72-77页 |
| 4.3.1 HC-Pro蛋白对ATP合酶水解活性的影响 | 第73页 |
| 4.3.2 HC-Pro蛋白对ATP合酶合成活性的影响 | 第73-74页 |
| 4.3.3 HC-Pro蛋白对ATP合酶含量的影响 | 第74-77页 |
| 第五章 PVY HC-Pro与NtMinD互作导致叶绿体分裂异常 | 第77-82页 |
| 5.1 HC-Pro抑制NtMinD的ATP酶活性 | 第77-78页 |
| 5.2 叶绿体分裂相关蛋白NtMinD和NtMinE互作位点的分析 | 第78-81页 |
| 5.2.1 叶绿体分裂相关蛋白NtMinE的克隆 | 第78-79页 |
| 5.2.2 NtMinE和NtMinD的互作位点分析 | 第79-81页 |
| 5.3 HC-Pro对叶绿体形态的影响 | 第81-82页 |
| 第六章 讨论与结论 | 第82-87页 |
| 6.1 讨论 | 第82-85页 |
| 6.1.1 病毒感染影响光合作用的能量基础 | 第83-84页 |
| 6.1.2 病毒感染影响光合作用的结构基础 | 第84-85页 |
| 6.2 结论 | 第85-87页 |
| 参考文献 | 第87-94页 |
| 致谢 | 第94-96页 |
| 个人简介 | 第96页 |
