| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-35页 |
| 1 油菜菌核病研究进展 | 第14-19页 |
| ·菌核菌生物学特性 | 第14-15页 |
| ·菌核菌的寄主 | 第15页 |
| ·菌核菌对油菜的危害及症状 | 第15页 |
| ·菌核菌的侵染方式及过程 | 第15-16页 |
| ·菌核病的致病类物质 | 第16-17页 |
| ·植物的抗真菌病害物质 | 第17-19页 |
| 2 植物抗病蛋白的研究进展 | 第19-21页 |
| ·病程相关蛋白 | 第19页 |
| ·抗病蛋白的结构特点 | 第19-21页 |
| 3 多聚半乳糖醛酸酶抑制蛋白研究进展 | 第21-27页 |
| ·关于国内、外研究动态 | 第21-23页 |
| ·PGIP的结构特征 | 第23页 |
| ·PGIP的含量、分布的差异与诱导表达 | 第23-25页 |
| ·PGIP基因在抗病基因工程中的应用 | 第25-27页 |
| 4 大肠杆菌表达外源蛋白的研究进展 | 第27-30页 |
| ·pET原核表达系统 | 第27页 |
| ·重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第27-30页 |
| 5 油菜转基因育种研究进展 | 第30-35页 |
| ·油菜抗菌核病基因工程育种的研究 | 第30-31页 |
| ·油菜转化方法的研究进展 | 第31-33页 |
| ·油菜转基因存在的问题 | 第33-35页 |
| 第二章 甘蓝型油菜pgip2基因的克隆及其蛋白结构预测 | 第35-51页 |
| 1 试验材料和方法 | 第35-41页 |
| ·材料 | 第35-36页 |
| ·试验方法 | 第36-41页 |
| 2 结果与分析 | 第41-49页 |
| ·RNA分析 | 第41页 |
| ·湘油15 pgip2基因分析 | 第41页 |
| ·pgip2 TA克隆PCR检测 | 第41页 |
| ·湘油15pgip2CDS序列的分析 | 第41-42页 |
| ·湘油15PGIP2蛋白结构分析及预测 | 第42-48页 |
| ·湘油15PGIP2蛋白质二级结构预测 | 第48页 |
| ·湘油15PGIP2蛋白质三级结构预测 | 第48-49页 |
| 3 讨论 | 第49-51页 |
| ·pgip2基因的诱导表达 | 第49页 |
| ·PGIP2蛋白结构特征 | 第49-51页 |
| 第三章 pgip2原核表达载体的构建及重组质粒pET-32a-pgip2的诱导表达 | 第51-61页 |
| 1 试验材料和方法 | 第51-55页 |
| ·材料 | 第51-52页 |
| ·试验方法 | 第52-55页 |
| 2 结果分析 | 第55-59页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-pgip2菌落PCR鉴定 | 第55-56页 |
| ·重组表达质粒pET-32a-pgip2双、单酶切鉴定 | 第56-57页 |
| ·pET-32a-pgip2蛋白小量诱导表达的条件优化及全菌液蛋白检测 | 第57-58页 |
| ·pET-32a-pgip2重组蛋白的可溶性分析 | 第58-59页 |
| 3 讨论 | 第59-61页 |
| ·关于pET-32a-pgip2重组质粒的构建 | 第59页 |
| ·关于pET-32a-pgip2融合蛋白的诱导表达 | 第59-61页 |
| 第四章 pET-32a-pgip2重组蛋白的亲和层析纯化和复性 | 第61-71页 |
| 1 试验材料和方法 | 第61-65页 |
| ·试验材料 | 第61-63页 |
| ·试验方法 | 第63-65页 |
| 2 结果与分析 | 第65-68页 |
| ·pET-32a-pgip2重组蛋白纯化电泳分析 | 第65-66页 |
| ·pET-32a-pgip2融合蛋白的Western-blotting检测 | 第66页 |
| ·pET-32a-pgip2重组蛋白复性电泳分析 | 第66-67页 |
| ·pET-32a-pgip2融合蛋白的蛋白浓度测定 | 第67页 |
| ·肠激酶酶切pET-32a-pgip2融合蛋白的Trx标签及纯化 | 第67-68页 |
| 3 讨论 | 第68-71页 |
| ·包涵体的破碎、洗涤和溶解 | 第68页 |
| ·pET-32a-pgip2重组蛋白的纯化 | 第68-69页 |
| ·pET-32a-pgip2融合蛋白的酶切 | 第69页 |
| ·pET-32a-pgip2重组蛋白的复性 | 第69-71页 |
| 第五章 PGIP2蛋白对菌核菌丝及菌核菌分泌多聚半乳糖醛酸酶(PG)的抑制作用 | 第71-77页 |
| 1 试验材料和方法 | 第71-73页 |
| ·试验材料 | 第71-72页 |
| ·试验方法 | 第72-73页 |
| 2 结果与分析 | 第73-75页 |
| ·PGIP2蛋白对菌核菌菌丝侵染油菜叶片的抑制作用 | 第73-74页 |
| ·DNS法测定PGIP2蛋白对PG的抑制作用 | 第74-75页 |
| ·琼脂糖扩散法测定PGIP2蛋白对PG的抑制作用 | 第75页 |
| 3 讨论 | 第75-77页 |
| 第六章 pgip2基因超表达载体的构建及转化油菜的研究 | 第77-89页 |
| 1 试验材料和方法 | 第77-82页 |
| ·材料 | 第77-79页 |
| ·试验方法 | 第79-82页 |
| 2 结果与分析 | 第82-86页 |
| ·湘油巧pgipZ基因分析和AT克隆菌落PCR检测 | 第82-83页 |
| ·重组质粒pRlllo-gPiPZ转化大肠杆菌菌落PCR检测和双酶切鉴正 | 第83-84页 |
| ·转pgiPZ基因油菜抗性苗的获得 | 第84页 |
| ·杭性苗油菜的PCR检测 | 第84-85页 |
| ·转pgipZ基因油菜半定量RT-pCR检测 | 第85页 |
| ·转pigpZ基因油菜离体叶片对菌核菌抗‘l’l鉴定分析 | 第85-86页 |
| 3 讨论 | 第86-89页 |
| ·关于油菜组培的讨论 | 第86-87页 |
| ·关于pgip2基因在98c40中的表达 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-101页 |
| 致谢 | 第101-102页 |
| 作者简介 | 第102页 |
