| 摘要 | 第5-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 中英文缩略词对照表 | 第12-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-24页 |
| 1.引言 | 第13-14页 |
| 2.单核细胞增生李斯特菌的致病性与生物被膜的研究进展 | 第14-22页 |
| 2.1 单核细胞增生李斯特菌的致病机理 | 第14-19页 |
| 2.1.1 LM的毒力因子 | 第14-17页 |
| 2.1.2 LM毒力基因调控因子 | 第17-19页 |
| 2.2 生物被膜对细菌致病性的影响 | 第19-22页 |
| 2.2.1 影响BF形成的因素 | 第19-21页 |
| 2.2.2 检测BF的常用方法 | 第21-22页 |
| 3.研究内容和研究方法 | 第22-24页 |
| 第二章 试验内容 | 第24-59页 |
| 试验一：LM90SB_2的flaA基因缺失株的构建 | 第24-38页 |
| 1.材料和方法 | 第25-32页 |
| 1.1 材料 | 第25-27页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第25页 |
| 1.1.2 引物 | 第25-26页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第26页 |
| 1.1.4 主要试剂 | 第26页 |
| 1.1.5 主要试剂的配制 | 第26-27页 |
| 1.2 方法 | 第27-32页 |
| 1.2.1 LM90SB_2基因组的提取 | 第27-28页 |
| 1.2.2 LM90SB_2中flaA基因的PCR扩增检测 | 第28页 |
| 1.2.3 LM90SB_2的flaA基因的克隆鉴定 | 第28页 |
| 1.2.4 flaA基因上下游同源臂片段的扩增和融合 | 第28-29页 |
| 1.2.5 融合重组片段与pMD19-T的连接 | 第29页 |
| 1.2.6 融合重组片段与pKSV7质粒的连接 | 第29页 |
| 1.2.7 电转化 | 第29-31页 |
| 1.2.8 同源重组、阳性转化子的筛选鉴定 | 第31页 |
| 1.2.9 菌落形态及及遗传稳定性检测 | 第31-32页 |
| 2.结果 | 第32-36页 |
| 2.1 flaA基因的扩增结果 | 第32页 |
| 2.2 flaA基因的上下游片段的扩增 | 第32-33页 |
| 2.3 融合PCR扩增结果 | 第33页 |
| 2.4 T载体连接后酶切及测序结果的分析 | 第33页 |
| 2.5 pKSV7-ΔflaA载体连接后酶切及测序结果的分析 | 第33-34页 |
| 2.6 阳性转化菌的筛选和稳定性检测 | 第34-35页 |
| 2.7 菌落形态及生长曲线的测定 | 第35-36页 |
| 2.7.1 菌落的形态观察 | 第35页 |
| 2.7.2 细菌的生长曲线的测定 | 第35-36页 |
| 3.讨论 | 第36-37页 |
| 3.1 关于基因功能研究方法 | 第36-37页 |
| 3.2 生长曲线测定 | 第37页 |
| 4.小结 | 第37-38页 |
| 试验二：flaA基因对LM90SB_2的运动能力、小鼠脏器载菌量及毒力的影响研究 | 第38-45页 |
| 1.材料和方法 | 第39-41页 |
| 1.1 材料 | 第39-40页 |
| 1.1.1 菌株与质粒 | 第39页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第39页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第39-40页 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 | 第40页 |
| 1.2 方法 | 第40-41页 |
| 1.2.1 LM90SB_2-ΔflaA的运动性试验 | 第40页 |
| 1.2.2 肝、脾、肾载菌量的测定 | 第40页 |
| 1.2.3 小鼠半数致死量的测定 | 第40-41页 |
| 2.结果 | 第41-43页 |
| 2.1 运动性试验结果 | 第41页 |
| 2.2 肝、脾、肾脏载菌量的测定结果 | 第41-42页 |
| 2.3 小鼠半数致死量的测定结果 | 第42-43页 |
| 3.讨论 | 第43-44页 |
| 3.1 鞭毛的运动与毒力 | 第43页 |
| 3.2 LM与载菌量的关系 | 第43-44页 |
| 4.小结 | 第44-45页 |
| 试验三：FlaA对LM90SB_2细胞黏附、侵袭能力影响的研究 | 第45-51页 |
| 1.材料和方法 | 第46-48页 |
| 1.1 材料 | 第46-47页 |
| 1.1.1 菌株与细胞 | 第46页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第46-47页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第47页 |
| 1.2 方法 | 第47-48页 |
| 1.2.1 对MBMEC细胞的黏附、侵袭 | 第47页 |
| 1.2.2 对RAW264.7细胞的黏附、侵袭 | 第47-48页 |
| 2.结果 | 第48-49页 |
| 2.1 LM90SB_2与LM90SB_2-ΔflaA对MBMEC细胞黏附和侵袭结果 | 第48页 |
| 2.2 LM90SB_2与LM90SB_2-ΔflaA对RAW264.7细胞的黏附和侵袭结果 | 第48-49页 |
| 3.讨论 | 第49-50页 |
| 3.1 MBMEC细胞与RAW264.7细胞的选择 | 第49-50页 |
| 3.2 鞭毛对细胞的黏附和侵袭作用 | 第50页 |
| 4.小结 | 第50-51页 |
| 试验四：flaA基因对LM90SB_2的BF形成能力影响的研究 | 第51-59页 |
| 1.材料和方法 | 第52-54页 |
| 1.1 材料 | 第52-53页 |
| 1.1.1 菌株 | 第52页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第52页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第52-53页 |
| 1.1.4 主要试剂的配制 | 第53页 |
| 1.2 方法 | 第53-54页 |
| 1.2.1 定性观察BF的形成差异—结晶紫染色观察BF的形成 | 第53页 |
| 1.2.2 定量检测BF的形成量—96孔板检测法(polystyrenemicrotiterplateassay) | 第53-54页 |
| 1.2.3 定性观察BF的形成差异—激光共聚焦显微镜观察BF的形成 | 第54页 |
| 2.结果 | 第54-57页 |
| 2.1 BF的形态结构的观察—结晶紫染色法 | 第54-55页 |
| 2.2 BF形成量的测定结果 | 第55-56页 |
| 2.3 BF的形态结构的观察—激光共聚焦显微镜(CLSM)观察法 | 第56-57页 |
| 3.讨论 | 第57-58页 |
| 3.1 鞭毛对BF的影响作用 | 第57-58页 |
| 3.2 温度对BF形成影响 | 第58页 |
| 4.小结 | 第58-59页 |
| 第三章 全文结论 | 第59-60页 |
| 第四章 论文创新点 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 作者简介 | 第74-75页 |
| 导师评阅表 | 第75页 |
