| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 引言 | 第10-26页 |
| 1 布鲁氏菌病研究进展 | 第10-14页 |
| 1.1 布鲁氏菌病的流行病学特点及诊断 | 第11-12页 |
| 1.1.1 流行病学特点 | 第11页 |
| 1.1.2 临床诊断 | 第11-12页 |
| 1.1.3 病理学诊断 | 第12页 |
| 1.1.4 实验室诊断 | 第12页 |
| 1.2 布鲁氏菌病的防控 | 第12-14页 |
| 2 布鲁氏菌的研究进展 | 第14-20页 |
| 2.1 布鲁氏菌主要毒力因子 | 第14-16页 |
| 2.1.1 脂多糖及其相关蛋白 | 第14-15页 |
| 2.1.2 外膜蛋白 | 第15页 |
| 2.1.3 Ⅳ型分泌系统 | 第15-16页 |
| 2.1.4 BvrR/BvrS双组份调节系统 | 第16页 |
| 2.1.5 环状β-1,2-葡聚糖 | 第16页 |
| 2.2 布鲁氏菌的组织嗜性 | 第16页 |
| 2.3 布鲁氏菌的感染机制 | 第16-18页 |
| 2.4 布鲁氏菌在宿主细胞内的运输 | 第18-19页 |
| 2.5 布鲁氏菌的免疫学研究 | 第19-20页 |
| 3 布鲁氏菌鞭毛蛋白的研究进展 | 第20-25页 |
| 3.1 布鲁氏菌对FliC表达的调控 | 第22-23页 |
| 3.2 布鲁氏菌FliC对宿主的影响 | 第23-25页 |
| 4 研究目的与意义 | 第25-26页 |
| 第一部分 B. melitensis M5-90株fliC基因缺失株的构建 | 第26-42页 |
| 前言 | 第26页 |
| 1 材料与方法 | 第26-36页 |
| 1.1 材料 | 第26-28页 |
| 1.1.1 主要实验仪器 | 第26-27页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第27页 |
| 1.1.3 菌株与质粒 | 第27-28页 |
| 1.1.4 主要试剂配制方法 | 第28页 |
| 1.2 实验方法 | 第28-36页 |
| 1.2.1 B.melitensis M5-90的培养 | 第28-29页 |
| 1.2.2 柯兹罗夫斯基染色 | 第29页 |
| 1.2.3 布鲁氏菌基因组的提取 | 第29页 |
| 1.2.4 细菌16S rRNA的序列分析 | 第29-30页 |
| 1.2.5 同源重组质粒的构建 | 第30-33页 |
| 1.2.6 连接产物的转化及鉴定 | 第33-34页 |
| 1.2.7 电转化B.melitensis M5-90及其鉴定 | 第34-36页 |
| 2 结果与分析 | 第36-40页 |
| 2.1 B.melitensis M5-90的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.1.1 B.melitensis柯兹罗夫斯基染色结果 | 第36-37页 |
| 2.1.2 16S rRNA测序结果及分析 | 第37页 |
| 2.2 同源重组质粒pGEM-7Zf(+)-ΔfliC的构建 | 第37-39页 |
| 2.2.1 fliC基因上、下游同源臂及卡那霉素抗性基因PCR扩增结果 | 第37-38页 |
| 2.2.2 ΔfliC片段的连接结果 | 第38页 |
| 2.2.3 pGEM-7Zf(+)载体与ΔfliC片段的连接 | 第38-39页 |
| 2.3 B.melitensis M5-90 ΔfliC的PCR验证结果 | 第39-40页 |
| 2.3.1 电转化B.melitensis M5-90 PCR验证结果 | 第39-40页 |
| 2.3.2 B.melitensis M5-90-ΔfliC遗传稳定性鉴定 | 第40页 |
| 3 讨论 | 第40-42页 |
| 第二部分 B. melitensis M5-90及缺失株M5-90-ΔfliC感染条件下RAW264.7细胞差异表达miRNAs、差异表达mRNAs的鉴定与联合分析 | 第42-70页 |
| 前言 | 第42页 |
| 1 材料与方法 | 第42-49页 |
| 1.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 1.1.1 主要实验仪器 | 第42-43页 |
| 1.1.2 主要实验试剂 | 第43页 |
| 1.1.3 主要试剂配制方法 | 第43页 |
| 1.2 实验方法 | 第43-49页 |
| 1.2.1 RAW264.7细胞的培养 | 第43-44页 |
| 1.2.2 B.melitensis M5-90 ΔfliC感染RAW264.7 | 第44页 |
| 1.2.3 感染后的RAW264.7细胞提取总RNA | 第44页 |
| 1.2.4 miRNA Microarray-Single基因表达谱芯片实验 | 第44-45页 |
| 1.2.5 Agilent基因表达谱芯片实验 | 第45页 |
| 1.2.6 miRNA Microarray-Single基因表达谱芯片结果验证 | 第45-46页 |
| 1.2.7 靶基因预测 | 第46页 |
| 1.2.8 Agilent基因表达谱芯片结果的验证 | 第46-47页 |
| 1.2.9 miRNA-mRNA联合分析结果的验证 | 第47-49页 |
| 2 结果与分析 | 第49-67页 |
| 2.1 总RNA质量检测 | 第49页 |
| 2.2 miRNA Microarray-Single表达谱芯片数据 | 第49-51页 |
| 2.3 miRNA Microarray-Single基因表达谱芯片qRT-PCR验证结果 | 第51-52页 |
| 2.4 Agilent基因表达谱芯片结果 | 第52-55页 |
| 2.5 miRNA-mRNA表达联合分析 | 第55-60页 |
| 2.6 Agilent基因表达谱芯片qRT-PCR验证结果 | 第60-64页 |
| 2.7 miRNA-mRNA表达联合分析结果的qRT-PCR验证结果 | 第64-67页 |
| 2.7.1 流式细胞术筛选mimic转染的最佳浓度 | 第64-66页 |
| 2.7.2 靶基因的qRT-PCR验证结果 | 第66-67页 |
| 3 讨论 | 第67-70页 |
| 全文结论 | 第70-71页 |
| 参考文献 | 第71-81页 |
| 英文缩略词 | 第81-83页 |
| 附录 | 第83-93页 |
| 致谢 | 第93页 |
