| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 缩略语 | 第7-10页 |
| 第1章 引言 | 第10-25页 |
| 1.1 抗体及其分离纯化 | 第10-12页 |
| 1.1.1 沉淀法 | 第10-11页 |
| 1.1.2 双水相萃取法 | 第11页 |
| 1.1.3 凝胶过滤层析法 | 第11页 |
| 1.1.4 离子交换层析法 | 第11-12页 |
| 1.1.5 疏水层析法 | 第12页 |
| 1.2 亲和层析法 | 第12-21页 |
| 1.2.1 亲和层析介质 | 第14-15页 |
| 1.2.2 亲和层析配体 | 第15-19页 |
| 1.2.3 蛋白质的固定化 | 第19-21页 |
| 1.3 Halotag标签在生物学中的应用 | 第21-24页 |
| 1.3.1 蛋白质的分离与纯化 | 第22页 |
| 1.3.2 蛋白质功能的评估 | 第22-23页 |
| 1.3.3 蛋白质与蛋白质/DNA相互作用 | 第23页 |
| 1.3.4 成像作用 | 第23-24页 |
| 1.4 主要研究内容与意义 | 第24-25页 |
| 1.4.1 研究内容 | 第24页 |
| 1.4.2 研究意义 | 第24-25页 |
| 第2章 抗Fc纳米抗体非定向偶联免疫亲和柱的制备 | 第25-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第25-27页 |
| 2.1.1 主要材料及试剂 | 第25-26页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第26-27页 |
| 2.2 方法和步骤 | 第27-31页 |
| 2.2.1 单域重链抗体T9的原核表达及纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.2 抗Fc纳米抗体非定向偶联免疫亲和柱的制备 | 第28-29页 |
| 2.2.3 制备免疫亲和层析柱 | 第29-30页 |
| 2.2.4 免疫亲和柱使用 | 第30页 |
| 2.2.5 免疫亲和柱使用条件的优化 | 第30-31页 |
| 2.2.6 免疫亲和柱的性能鉴定 | 第31页 |
| 2.3 结果与分析 | 第31-39页 |
| 2.3.1 目的蛋白的诱导表达 | 第31-32页 |
| 2.3.2 纳米抗体T9活性的鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.3 EDC/NHS活化条件的优化 | 第33-34页 |
| 2.3.4 EDC/NHS偶联条件的优化 | 第34-36页 |
| 2.3.5 偶联量的测定 | 第36页 |
| 2.3.6 免疫亲和柱使用条件的优化 | 第36-38页 |
| 2.3.7 抗Fc免疫亲和柱性能的鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第39-42页 |
| 2.4.1 讨论 | 第39-40页 |
| 2.4.2 小结 | 第40-42页 |
| 第3章 抗Fc纳米抗体定向偶联免疫亲和柱的制备 | 第42-59页 |
| 3.1 实验材料 | 第42-43页 |
| 3.1.1 主要材料及试剂 | 第42-43页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第43页 |
| 3.2 方法和步骤 | 第43-49页 |
| 3.2.1 Halotag-T9表达载体的构建 | 第43-47页 |
| 3.2.2 Halotag-T9蛋白的诱导表达 | 第47页 |
| 3.2.3 亲和力分析 | 第47-48页 |
| 3.2.4 抗Fc纳米抗体定向偶联免疫亲和柱的制备 | 第48-49页 |
| 3.2.5 抗Fc纳米抗体定向偶联免疫亲和柱性能的鉴定 | 第49页 |
| 3.3 结果与分析 | 第49-57页 |
| 3.3.1 Halotag-T9表达载体的构建 | 第49-50页 |
| 3.3.2 Halotag-T9蛋白的诱导表达 | 第50-53页 |
| 3.3.3 亲和力分析 | 第53-54页 |
| 3.3.5 偶联量的测定 | 第54-55页 |
| 3.3.6 抗Fc定向偶联免疫亲和柱性能的鉴定 | 第55-57页 |
| 3.4 讨论与小结 | 第57-59页 |
| 3.4.1 讨论 | 第57-58页 |
| 3.4.2 小结 | 第58-59页 |
| 第4章 结论与展望 | 第59-60页 |
| 4.1 主要研究成果 | 第59页 |
| 4.2 展望 | 第59-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-68页 |
| 攻读硕士学位期间的研究成果 | 第68页 |
