| 摘要 | 第6-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第15-29页 |
| 1.1 猫杯状病毒生物学特性 | 第15-19页 |
| 1.1.1 猫杯状病毒概述 | 第15页 |
| 1.1.2 杯状病毒科 | 第15页 |
| 1.1.3 FCV病毒粒子及其理化特性 | 第15-16页 |
| 1.1.4 FCV基因组 | 第16-17页 |
| 1.1.5 非结构蛋白 | 第17-18页 |
| 1.1.6 结构蛋白 | 第18-19页 |
| 1.1.7 FCV的感染周期 | 第19页 |
| 1.2 流行病学 | 第19-20页 |
| 1.3 诊断和检测方法 | 第20-21页 |
| 1.4 防制 | 第21页 |
| 1.5 FCV与细胞的相互作用 | 第21-23页 |
| 1.5.1 凋亡 | 第21-22页 |
| 1.5.2 细胞应激颗粒 | 第22页 |
| 1.5.3 病毒抑制宿主基因表达 | 第22-23页 |
| 1.6 固有免疫 | 第23-26页 |
| 1.6.1 固有免疫概述 | 第23-24页 |
| 1.6.2 Ⅰ型干扰素通路 | 第24-25页 |
| 1.6.3 干扰素刺激基因 | 第25-26页 |
| 1.7 iTRAQ蛋白质组技术 | 第26-27页 |
| 1.8 转录组测序 | 第27页 |
| 1.9 目的意义 | 第27-29页 |
| 第二章 FCV感染CRFK细胞的ITRAQ蛋白质组学研究 | 第29-35页 |
| 2.1 材料和方法 | 第29-30页 |
| 2.1.1 毒株、细胞,和主要试剂 | 第29页 |
| 2.1.2 FCV毒价测定 | 第29页 |
| 2.1.3 接毒与收样 | 第29-30页 |
| 2.1.4 蛋白提取、样品质控和ITRAQ测序 | 第30页 |
| 2.2 结果 | 第30-32页 |
| 2.2.1 蛋白样品浓度测定 | 第30页 |
| 2.2.2 蛋白的完整性分析 | 第30-31页 |
| 2.2.3 iTRAQ测序的基本情况 | 第31页 |
| 2.2.4 蛋白GO注释分析 | 第31-32页 |
| 2.2.5 差异蛋白分析 | 第32页 |
| 2.3 讨论 | 第32-35页 |
| 第三章 FCV阻断JAK/STAT通路的分子机制 | 第35-53页 |
| 3.1 材料和方法 | 第35-43页 |
| 3.1.1 毒株、细胞和载体 | 第35页 |
| 3.1.2 主要试剂 | 第35页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第35-36页 |
| 3.1.4 RNA提取 | 第36页 |
| 3.1.5 cDNA的合成 | 第36页 |
| 3.1.6 VSV毒价的测定 | 第36页 |
| 3.1.7 IFN-α对FCV抑制试验 | 第36-37页 |
| 3.1.8 IFN-α对VSV抑制试验 | 第37页 |
| 3.1.9 间接免疫荧光(IFA) | 第37页 |
| 3.1.10 病毒紫外灭活 | 第37页 |
| 3.1.11 双荧光素酶报告试验 | 第37-38页 |
| 3.1.12 STAT1和STAT2磷酸化激活 | 第38页 |
| 3.1.13 流式细胞术对细胞表面IFNAR1表达量的检测 | 第38-39页 |
| 3.1.14 FCV对IFNmRNA表达检测 | 第39页 |
| 3.1.15 干扰素刺激基因IFITM1、Viperin和ISG15的mRNA表达量检测 | 第39页 |
| 3.1.16 实时荧光定量PCR(qRT-PCR) | 第39页 |
| 3.1.17 半定量PCR | 第39-40页 |
| 3.1.18 放线菌素加药方法 | 第40页 |
| 3.1.19 Westernblot检测 | 第40页 |
| 3.1.20 转录组测序 | 第40页 |
| 3.1.21 Northernblot用RNA抽提 | 第40-41页 |
| 3.1.22 RNA甲醛琼脂糖凝胶电泳 | 第41页 |
| 3.1.23 变性RNA在膜上的转移和固定 | 第41-42页 |
| 3.1.24 杂交和显色 | 第42-43页 |
| 3.1.25 数据统计学分析 | 第43页 |
| 3.2 结果 | 第43-50页 |
| 3.2.1 IFN-α不能够有效抑制FCV复制 | 第43页 |
| 3.2.2 FCV能够上调IFN-β的表达 | 第43-44页 |
| 3.2.3 FCV感染对ISRE元件的影响 | 第44页 |
| 3.2.4 FCV感染可以抑制IFITM1、Viperin和ISG15的mRNA上调 | 第44-45页 |
| 3.2.5 FCV感染可以抑制STAT1和STAT2的磷酸化 | 第45-46页 |
| 3.2.6 FCV感染后IFNAR1蛋白表达量降低 | 第46页 |
| 3.2.7 FCV感染后IFNAR1的mRNA表达量减少 | 第46-47页 |
| 3.2.8 FCV感染后加速了IFNAR1和GAPDH的mRNA降解速度 | 第47页 |
| 3.2.9 FCV抑制外源转染质粒的表达 | 第47-48页 |
| 3.2.10 FCV的PP和p30非结构蛋白能够使其他基因mRNA表达量下降 | 第48-49页 |
| 3.2.11 FCV感染后宿主的mRNA比例减少 | 第49-50页 |
| 3.3 讨论 | 第50-53页 |
| 第四章 FCV对IRF1抗病毒作用的拮抗 | 第53-62页 |
| 4.1 材料和方法 | 第53-55页 |
| 4.1.1 毒株、细胞和载体 | 第53页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第53页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第53页 |
| 4.1.4 淋巴细胞的分离 | 第53页 |
| 4.1.5 IRF1克隆和抗FCV的鉴定 | 第53-54页 |
| 4.1.6 感染后不同时间IRF1对FCV的抑制 | 第54页 |
| 4.1.7 荧光定量RT-PCR试验 | 第54页 |
| 4.1.8 双荧光素酶报告试验 | 第54页 |
| 4.1.9 激光共聚焦试验 | 第54页 |
| 4.1.10 IRF1N端序列比对 | 第54-55页 |
| 4.1.11 数据统计学分析 | 第55页 |
| 4.2 结果 | 第55-59页 |
| 4.2.1 IRF1对FCV抑制的验证 | 第55页 |
| 4.2.2 IRF1对FCV抑制有剂量依赖性 | 第55-56页 |
| 4.2.3 感染后不同时间IRF1都能够抑制FCV的复制 | 第56页 |
| 4.2.4 IRF1蛋白N端的DBD区域和NLS区域很保守 | 第56-57页 |
| 4.2.5 IRF1精准的定位在细胞核 | 第57页 |
| 4.2.6 IRF1可以激活IFN-β启动子和ISRE元件 | 第57-58页 |
| 4.2.7 FCV可以下调IRF1的表达 | 第58-59页 |
| 4.3 讨论 | 第59-62页 |
| 第五章 全文结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-74页 |
| 附录 | 第74-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 个人简历 | 第77-78页 |
