| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-8页 |
| 第一章 文献综述 | 第9-15页 |
| 1 病原学 | 第9页 |
| 2 细菌分型 | 第9-10页 |
| 2.1 血清型分型 | 第9页 |
| 2.2 基因型分型 | 第9-10页 |
| 3 致病性研究进展 | 第10-13页 |
| 3.1 致病机理的研究 | 第10-11页 |
| 3.2 致病因子的相关研究 | 第11-13页 |
| 4 流行病学及临床症状 | 第13页 |
| 5 诊断技术 | 第13-14页 |
| 6 免疫及预防 | 第14-15页 |
| 第二章 2012~2014年江西地区副猪嗜血杆菌分离株ERIC-PCR指纹图谱 | 第15-22页 |
| 1 材料 | 第15-17页 |
| 1.1 菌种 | 第15-16页 |
| 1.2 主要试剂 | 第16-17页 |
| 1.3 主要仪器设备 | 第17页 |
| 1.4 常用试剂配制 | 第17页 |
| 2 方法 | 第17页 |
| 2.1 DNA模板制备 | 第17页 |
| 2.2 引物合成 | 第17页 |
| 2.3 PCR扩増及产物检测 | 第17页 |
| 2.4 电泳图谱比较及数据分析 | 第17页 |
| 3 结果 | 第17-20页 |
| 3.1 副猪嗜血杆菌参考株ERIC-PCR结果 | 第17-18页 |
| 3.2 江西地区副猪嗜血杆菌ERIC-PCR结果 | 第18-20页 |
| 4 讨论 | 第20-22页 |
| 第三章 副猪嗜血杆菌hhdA基因的克隆与生物信息学分析 | 第22-35页 |
| 1 材料 | 第22-23页 |
| 1.1 毒株 | 第22页 |
| 1.2 载体及菌株 | 第22页 |
| 1.3 主要试剂 | 第22页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 1.5 常用试剂的配制 | 第23页 |
| 2 方法 | 第23-26页 |
| 2.1 DNA模板制备 | 第23页 |
| 2.2 引物合成 | 第23页 |
| 2.3 目的基因的PCR扩增 | 第23-24页 |
| 2.4 目的基因的回收纯化 | 第24页 |
| 2.5 目的基因的克隆 | 第24页 |
| 2.6 pMD18-T-hhdA阳性质粒鉴定 | 第24-25页 |
| 2.7 HPS hhdA蛋白的序列分析 | 第25-26页 |
| 3 结果 | 第26-33页 |
| 3.1 目的基因PCR结果 | 第26-27页 |
| 3.2 重组质粒pMD-hhdA双酶切鉴定 | 第27页 |
| 3.3 序列测序拼接 | 第27-28页 |
| 3.4 hhdA蛋白的理化性质分析 | 第28页 |
| 3.5 HPS-hhdA基因编码蛋白质的疏水性分析 | 第28-29页 |
| 3.6 跨膜区分析 | 第29页 |
| 3.7 hhdA蛋白信号肽预测结果 | 第29-30页 |
| 3.8 hhdA潜在的磷酸化位点分析 | 第30-31页 |
| 3.9 HPS-hhdA基因编码蛋白质的主要抗原域预测 | 第31页 |
| 3.10 HPS-hhdA基因编码蛋白质的表面可能性预测 | 第31页 |
| 3.11 hhdA蛋白二级结构的预测 | 第31-32页 |
| 3.12 hhdA基因同源性分析 | 第32页 |
| 3.13 hhdA基因的系统发育进化树 | 第32-33页 |
| 4 讨论 | 第33-35页 |
| 第四章 HPS hhdA基因的原核表达及其免疫保护作用的研究 | 第35-49页 |
| 1 材料 | 第35-37页 |
| 1.1 毒株 | 第35页 |
| 1.2 载体及菌株 | 第35页 |
| 1.3 主要试剂 | 第35页 |
| 1.4 主要仪器设备 | 第35-36页 |
| 1.5 试剂、培养基的配制 | 第36页 |
| 1.6 蛋白电泳试剂配制 | 第36页 |
| 1.7 蛋白纯化与复性相关试剂配制 | 第36-37页 |
| 1.8 Western Blot试剂配制 | 第37页 |
| 1.9 ELISA试剂的配制 | 第37页 |
| 2 方法 | 第37-41页 |
| 2.1 重组质粒p MD18-T-hhdA的构建 | 第37页 |
| 2.2 表达载体p ET-32a( + )-hhdA的构建 | 第37-38页 |
| 2.3 重组hhd A蛋白的表达、鉴定与纯化 | 第38-40页 |
| 2.4 重组蛋白对小鼠免疫保护效力的试验 | 第40-41页 |
| 3 结果 | 第41-47页 |
| 3.1 重组pET-32a-hhdA质粒的双酶切鉴定结果 | 第41页 |
| 3.2 IPTG诱导浓度的优化 | 第41-42页 |
| 3.3 诱导时间的优化 | 第42页 |
| 3.4 重组蛋白表达形式的鉴定 | 第42-43页 |
| 3.5 咪唑浓度优化 | 第43-44页 |
| 3.6 复性重组蛋白的SDS-PAGE分析 | 第44页 |
| 3.7 蛋白浓度的测定结果 | 第44-45页 |
| 3.8 重组蛋白的Western Blot鉴定结果 | 第45页 |
| 3.9 TSA平板培养HPS的计数 | 第45-46页 |
| 3.10 HPS LD50的测定 | 第46页 |
| 3.11 小鼠免疫后的抗体水平 | 第46-47页 |
| 3.12 小鼠免疫保护试验 | 第47页 |
| 4 讨论 | 第47-49页 |
| 4.1 关于利用HPS hhdA蛋白作为研究的目的 | 第47页 |
| 4.2 关于HPS hhdA蛋白表达系统的选择 | 第47-48页 |
| 4.3 关于pET-32a(+)-hhdA的表达 | 第48页 |
| 4.4 关于hhdA表达产物的免疫原性 | 第48-49页 |
| 全文总结 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
