| 摘要 | 第10-12页 |
| Abstract | 第12-13页 |
| 1 前言 | 第14-24页 |
| 1.1 支原体概述 | 第14-16页 |
| 1.1.1 支原体的概念及特征 | 第14页 |
| 1.1.2 支原体的分类 | 第14-15页 |
| 1.1.3 支原体的分离鉴定 | 第15页 |
| 1.1.4 支原体病的诊断 | 第15-16页 |
| 1.1.5 支原体的致病机制 | 第16页 |
| 1.2 支原体及其粘附蛋白的研究进展 | 第16-20页 |
| 1.2.1 人肺炎支原体(M.pneumonia,Mp) | 第16-17页 |
| 1.2.2 人生殖支原体(M.genitalium,Mg) | 第17-18页 |
| 1.2.3 猪肺炎支原体(M.opneumoniae,Mhp) | 第18页 |
| 1.2.4 牛支原体(M.bovis) | 第18-19页 |
| 1.2.5 丝状支原体丝状亚种SC小菌落型(M.mycoides subsp.Mycoides SC, MmmSC) | 第19页 |
| 1.2.6 山羊传染性胸膜肺炎相关支原体 | 第19-20页 |
| 1.3 leachii支原体概述 | 第20-22页 |
| 1.3.1 发现与研究历史 | 第20页 |
| 1.3.2 致病性 | 第20-22页 |
| 1.3.3 传播途径 | 第22页 |
| 1.3.4 诊断 | 第22页 |
| 1.3.5 防控 | 第22页 |
| 1.4 研究的目的及意义 | 第22-24页 |
| 1.4.1 leachii支原体粘附蛋白的筛选 | 第22-23页 |
| 1.4.2 leachii支原体单克隆抗体的制备 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-32页 |
| 2.1 材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株、载体、细胞及实验动物 | 第24页 |
| 2.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第24页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.1.4 主要试剂及配置方法 | 第24-26页 |
| 2.2 方法 | 第26-32页 |
| 2.2.1 leachii支原体的培养 | 第26页 |
| 2.2.2 leachii支原体基因组的提取 | 第26页 |
| 2.2.3 lppA基因及eno基因的PCR扩增 | 第26页 |
| 2.2.4 eno基因的定点诱变 | 第26-27页 |
| 2.2.5 重组蛋白的表达与纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.6 重组蛋白多克隆抗体的制备 | 第28页 |
| 2.2.7 Western b1ot | 第28页 |
| 2.2.8 LPPA蛋白及a-烯醇酶的膜定位 | 第28页 |
| 2.2.9 细胞粘附抑制试验 | 第28-29页 |
| 2.2.11 重组蛋白特异性粘附试验 | 第29页 |
| 2.2.12 leachii支原体全菌体免疫原的制备 | 第29-30页 |
| 2.2.13 动物的免疫接种 | 第30页 |
| 2.2.14 杂交瘤细胞株的建立 | 第30-31页 |
| 2.2.15 杂交瘤细胞的筛选 | 第31页 |
| 2.2.16 腹水的制备 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-43页 |
| 3.1 leachii支原体粘附蛋白的筛选与鉴定 | 第32-38页 |
| 3.1.1 lppA和eno基因的获得 | 第32-34页 |
| 3.1.2 pET28a-lppA及pET28a-eno重组质粒的构建 | 第34-35页 |
| 3.1.3 重组质粒pET28a-lppA和pET28a-eno的诱导表达 | 第35-36页 |
| 3.1.4 重组LPPA蛋白和a-烯醇酶的纯化 | 第36-37页 |
| 3.1.5 LPPA及a-烯醇酶的膜定位 | 第37页 |
| 3.1.6 LPPA及a-烯醇酶的粘附特性 | 第37-38页 |
| 3.2 leachii支原体单克隆抗体的制备 | 第38-43页 |
| 3.2.1 leachii支原体单克隆抗体的反应性 | 第38-40页 |
| 3.2.2 leachii支原体单克隆抗体的效价 | 第40页 |
| 3.2.3 leachii支原体单克隆抗体的亚类鉴定 | 第40-41页 |
| 3.2.4 leachii支原体单克隆抗体的粘附抑制特性 | 第41-43页 |
| 4 全文结论 | 第43-44页 |
| 4.1 leachii支原体粘附蛋白的筛选 | 第43页 |
| 4.2 leachii支原体单克隆抗体的制备 | 第43-44页 |
| 5 讨论 | 第44-47页 |
| 5.1 LPPA蛋白与a-烯醇酶在leachii支原体粘附过程中的作用 | 第44页 |
| 5.2 粘附蛋白与leachii支原体毒力的相关性 | 第44-45页 |
| 5.3 粘附蛋白作为疫苗候选抗原的免疫保护性 | 第45页 |
| 5.4 用单克隆抗体鉴定leachii支原体的粘附蛋白 | 第45-46页 |
| 5.5 单克隆抗体在leachii支原体病诊断中的应用 | 第46-47页 |
| 致谢 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-53页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第53页 |
