| 中文摘要 | 第3-5页 |
| 英文摘要 | 第5-7页 |
| 1 绪论 | 第12-26页 |
| 1.1 问题的提出 | 第12-13页 |
| 1.2 国内外研究现状 | 第13-24页 |
| 1.2.1 ACL的损伤与修复 | 第13-16页 |
| 1.2.2 影响ACL损伤修复的相关因素 | 第16-21页 |
| 1.2.3 生长因子与ACL组织修复 | 第21-24页 |
| 1.3 本文研究的目的、意义及主要内容 | 第24-26页 |
| 1.3.1 本文研究目的及意义 | 第24页 |
| 1.3.2 本文研究的主要内容 | 第24-25页 |
| 1.3.3 本文研究的主要创新点 | 第25-26页 |
| 2 MGF对ACL损伤后增殖及胞外基质代谢的影响 | 第26-70页 |
| 2.1 引言 | 第26-27页 |
| 2.2 实验材料与试剂 | 第27-34页 |
| 2.2.1 ACL成纤维细胞来源及实验动物 | 第27-28页 |
| 2.2.2 主要实验仪器及耗材 | 第28-29页 |
| 2.2.3 主要实验试剂 | 第29-31页 |
| 2.2.4 主要试剂的配制 | 第31-34页 |
| 2.3 实验方法 | 第34-46页 |
| 2.3.1 人ACL成纤维细胞的分离、培养与鉴定 | 第34-35页 |
| 2.3.2 ACL成纤维细胞损伤模型的建立 | 第35页 |
| 2.3.3 实时定量PCR分析MGF mRNA表达水平 | 第35-36页 |
| 2.3.4 MTS分析细胞活力 | 第36-37页 |
| 2.3.5 细胞凋亡的检测 | 第37页 |
| 2.3.6 细胞骨架重构相关基因/蛋白的检测 | 第37-39页 |
| 2.3.7 MMP-2 活性与表达的检测 | 第39-40页 |
| 2.3.8 实时定量PCR分析I、III型胶原表达 | 第40页 |
| 2.3.9 细胞增殖的检测 | 第40-41页 |
| 2.3.10 细胞增殖机制的检测 | 第41-42页 |
| 2.3.11 动物ACL损伤模型的建立及给药 | 第42-43页 |
| 2.3.12 苏木精-伊红(hematoxylin-eosin, H-E)染色 | 第43-45页 |
| 2.3.13 Masson染色 | 第45页 |
| 2.3.14 组织水平I、III型胶原表达的检测 | 第45-46页 |
| 2.3.15 组织水平细胞增殖的检测 | 第46页 |
| 2.4 实验结果 | 第46-66页 |
| 2.4.1 ACL成纤维细胞的分离、鉴定 | 第46-47页 |
| 2.4.2 高强度拉伸抑制ACL成纤维细胞MGF mRNA的表达 | 第47-49页 |
| 2.4.3 MGF恢复了损伤ACL成纤维细胞的活力 | 第49-50页 |
| 2.4.4 MGF对损伤ACL成纤维细胞凋亡无影响 | 第50-51页 |
| 2.4.5 MGF调控损伤ACL成纤维细胞骨架相关基因/蛋白的表达 | 第51-53页 |
| 2.4.6 MGF降低了损伤ACL成纤维细胞中MMP-2 的活性与表达 | 第53-56页 |
| 2.4.7 MGF调控损伤ACL成纤维细胞中I、III型胶原的表达 | 第56-59页 |
| 2.4.8 MGF促进了损伤ACL成纤维细胞的增殖能力 | 第59-61页 |
| 2.4.9 MEK-ERK1/2 通路参与了MGF对损伤ACL成纤维细胞增殖能力的调控 | 第61-63页 |
| 2.4.10 MGF提高了ACL组织损伤位点细胞外基质分泌 | 第63-64页 |
| 2.4.11 MGF提高了ACL组织损伤位点胶原合成 | 第64-65页 |
| 2.4.12 MGF促进了ACL组织损伤位点细胞增殖能力 | 第65-66页 |
| 2.5 分析与讨论 | 第66-68页 |
| 2.6 本章小结 | 第68-70页 |
| 3 MGF对严重低氧条件下ACL细胞凋亡与血管生成的影响 | 第70-106页 |
| 3.1 引言 | 第70-71页 |
| 3.2 实验材料与试剂 | 第71-74页 |
| 3.2.1 ACL成纤维细胞来源及实验动物 | 第71页 |
| 3.2.2 主要实验仪器及耗材 | 第71-72页 |
| 3.2.3 主要实验试剂 | 第72-73页 |
| 3.2.4 主要试剂的配制 | 第73-74页 |
| 3.3 实验方法 | 第74-81页 |
| 3.3.1 严重低氧模型的建立 | 第74页 |
| 3.3.2 严重低氧条件下ACL成纤维细胞凋亡的检测 | 第74-75页 |
| 3.3.3 实时定量PCR分析MGF mRNA表达水平 | 第75页 |
| 3.3.4 MGF调控ACL成纤维细胞HIF-1? 表达的检测 | 第75页 |
| 3.3.5 MGF调控ACL成纤维细胞增殖的检测 | 第75-76页 |
| 3.3.6 MGF调控ACL成纤维细胞凋亡的检测 | 第76页 |
| 3.3.7 MGF调控caspase家族表达的检测 | 第76-77页 |
| 3.3.8 MGF调控线粒体膜电位转变的检测 | 第77-78页 |
| 3.3.9 Western blotting分析线粒体凋亡途径相关蛋白的表达 | 第78页 |
| 3.3.10 MGF调控ACL成纤维细胞凋亡的相关分子通路 | 第78-79页 |
| 3.3.11 动物ACL损伤模型的建立及给药 | 第79页 |
| 3.3.12 组织免疫荧光分析MGF对组织水平HIF-1? 表达的影响 | 第79页 |
| 3.3.13 TUNEL染色分析组织水平的细胞凋亡现象 | 第79-80页 |
| 3.3.14 组织免疫荧光分析VEGF? 表达及血管生成 | 第80页 |
| 3.3.15 组织免疫荧光分析SDF-1? 及CXCR4表达 | 第80页 |
| 3.3.16 CD44表达的检测及MGF对MSCs促血管生成能力的影响 | 第80-81页 |
| 3.4 实验结果 | 第81-101页 |
| 3.4.1 严重低氧促进了HIF-1? 的表达 | 第81-82页 |
| 3.4.2 严重低氧诱导ACL成纤维细胞凋亡发生 | 第82-83页 |
| 3.4.3 严重低氧抑制了ACL成纤维细胞中MGF mRNA的表达 | 第83-84页 |
| 3.4.4 MGF调控了低氧条件下ACL成纤维细胞中HIF-1? 的表达 | 第84-85页 |
| 3.4.5 MGF调控了低氧条件下ACL成纤维细胞的增殖能力 | 第85-87页 |
| 3.4.6 MGF调控了低氧条件下ACL成纤维细胞的凋亡 | 第87-88页 |
| 3.4.7 MGF调控了低氧条件下ACL成纤维细胞中caspase-3/7/9 的表达 | 第88-89页 |
| 3.4.8 MGF通过线粒体途径调控了低氧条件下ACL成纤维细胞凋亡 | 第89-91页 |
| 3.4.9 MGF依赖MEK-ERK1/2、PI3K-Akt通路调控低氧条件下ACL成纤维细胞凋亡 | 第91-93页 |
| 3.4.10 MGF降低了损伤ACL组织中HIF-1? 的表达 | 第93-94页 |
| 3.4.11 MGF降低了损伤ACL组织中细胞凋亡现象 | 第94-95页 |
| 3.4.12 MGF促进了损伤ACL组织CD31、CD34与VEGF? 的表达 | 第95-98页 |
| 3.4.13 MGF通过SDF-1?/CXCR4通路促进了CD44阳性细胞的招募 | 第98-101页 |
| 3.5 分析与讨论 | 第101-104页 |
| 3.6 本章小结 | 第104-106页 |
| 4 MGF对ACL成纤维细胞迁移能力的影响 | 第106-124页 |
| 4.1 引言 | 第106页 |
| 4.2 实验材料与试剂 | 第106-108页 |
| 4.2.1 ACL成纤维细胞来源及实验动物 | 第106页 |
| 4.2.2 主要实验仪器及耗材 | 第106-107页 |
| 4.2.3 主要实验试剂 | 第107-108页 |
| 4.2.4 主要试剂的配制 | 第108页 |
| 4.3 实验方法 | 第108-113页 |
| 4.3.1 细胞活力检测 | 第108页 |
| 4.3.2 细胞划痕检测 | 第108-109页 |
| 4.3.3 Trnaswell检测细胞迁移 | 第109页 |
| 4.3.4 明胶酶谱实验分析MMP-2 活性 | 第109页 |
| 4.3.5 细胞骨架FITC染色检测 | 第109-110页 |
| 4.3.6 ACL成纤维细胞迁移相关基因/蛋白表达的检测 | 第110-111页 |
| 4.3.7 ROCK1参与调控ACL成纤维细胞迁移的检测 | 第111页 |
| 4.3.8 PI3K-Akt通路参与调控ACL成纤维细胞迁移的检测 | 第111-112页 |
| 4.3.9 动物模型的建立及给药 | 第112页 |
| 4.3.10 损伤ACL组织MMP-2 表达的检测 | 第112页 |
| 4.3.11 MGF对兔损伤ACL组织最大断裂点影响 | 第112-113页 |
| 4.4 实验结果 | 第113-121页 |
| 4.4.1 MGF对正常ACL成纤维细胞活力无影响 | 第113-114页 |
| 4.4.2 MGF促进了正常ACL成纤维细胞迁移能力 | 第114-115页 |
| 4.4.3 MGF促进了正常ACL成纤维细胞MMP-2/9 的活性 | 第115页 |
| 4.4.4 MGF促进了ACL成纤维细胞伪足的产生 | 第115-116页 |
| 4.4.5 MGF对ACL成纤维细胞运动性能相关基因表达的影响 | 第116-117页 |
| 4.4.6 MGF调控ACL成纤维细胞迁移的相关信号通路 | 第117-119页 |
| 4.4.7 MGF对损伤ACL组织中MMP-2 表达的影响 | 第119-120页 |
| 4.4.8 MGF对损伤ACL组织最大断裂点的影响 | 第120-121页 |
| 4.5 分析与讨论 | 第121-122页 |
| 4.6 本章小结 | 第122-124页 |
| 5 结论与展望 | 第124-126页 |
| 5.1 主要结论 | 第124-125页 |
| 5.2 后续研究工作展望 | 第125-126页 |
| 致谢 | 第126-128页 |
| 参考文献 | 第128-140页 |
| 附录 | 第140-141页 |
| A. 作者在攻读学位期间发表的论文目录 | 第140页 |
| B. 作者在攻读学位期间发表的会议论文目录 | 第140-141页 |
| C. 作者在攻读学位期间参与的科研项目目录 | 第141页 |
