| 中文摘要 | 第3-7页 |
| ABSTRACTS | 第7-15页 |
| ABBREVIATIONS | 第19-21页 |
| CHAPTER 1 INTRODUCTION | 第21-53页 |
| 1.1 SMADS FAMILY AND ITS ALTERNATIVE SPLICING | 第24-41页 |
| 1.1.1 Introduction of Smads | 第24-25页 |
| 1.1.2 Smad family and its functions in TGF-beta Signaling Pathway | 第25-28页 |
| 1.1.3 Structures of SMADs | 第28-30页 |
| 1.1.4 Alternative Splicing and its important roles in cancer | 第30-34页 |
| 1.1.5 Roles of Smad4 in cancer | 第34-41页 |
| 1.2 POSITIVE AND NEGATIVE EFFECTS OF TGF-Β SIGNALING PATHWAYS INCARCINOGENESIS | 第41-51页 |
| 1.2.1 Introduction of TGF-β | 第41-42页 |
| 1.2.2 TGF-βs isoforms and Latent-TGF-β | 第42-44页 |
| 1.2.3 Molecular mechanism of TGF-β family signaling pathways | 第44-45页 |
| 1.2.4 Importance of TGF-β in cancer | 第45-46页 |
| 1.2.5 Cytostatic and apoptotic effects of TGF-β | 第46-48页 |
| 1.2.6 Tumor promoting role of TGF-β | 第48-49页 |
| 1.2.7 TGF-β effect tumor Angiogenesis | 第49-51页 |
| 1.2.8 Mutation in TGF-β Signaling pathways component in tumors | 第51页 |
| 1.3 AIMS AND OBJECTIVES | 第51-53页 |
| CHAPTER 2 EFFECT OF SMAD4 ALTERNATIVE SPLICING ONHACAT CELLS | 第53-93页 |
| 2.1 MATERIALS AND METHODS | 第53-57页 |
| 2.1.1 Materials, reagents and antibodies | 第53页 |
| 2.1.2 The Major experimental equipment’s, utensils and supplies | 第53-54页 |
| 2.1.3 The main Laboratory reagents and consumables | 第54-57页 |
| 2.1.4 Preparation of some Reagents | 第57页 |
| 2.1.5 Trypsin Preparation | 第57页 |
| 2.2 ALTERNATIVE SPLICING OF SMAD4 IN HACAT CELL UNDER UVBIRRADIATION INTRODUCTION | 第57-61页 |
| 2.3 MATERIALS AND METHODS | 第61-81页 |
| 2.3.1 laboratory equipment, materials and reagents | 第61-62页 |
| 2.3.2 Materials and Reagents | 第62-63页 |
| 2.3.3 Cell culture | 第63-64页 |
| 2.3.4 UVB Irradiation | 第64页 |
| 2.3.5 Cell extraction | 第64页 |
| 2.3.6 RNA extraction and detection | 第64-66页 |
| 2.3.7 RNA reverse transcription | 第66页 |
| 2.3.8 Nested RT- PCR | 第66-67页 |
| 2.3.9 Plasmid (p CDNA 3.1) Construction and Sequencing Analysis | 第67-68页 |
| 2.3.10 Gel cutting and purification | 第68页 |
| 2.3.11 DNA Purification from Agarose Gels | 第68-69页 |
| 2.3.12 Construction of PCDNA 3.1+, pc DNA 3.1-Smad4-FL, and pc DNA 3.1-Smad4BIsoform plasmids | 第69-72页 |
| 2.3.13 Double digestion and ligation | 第72-73页 |
| 2.3.15 Transformation | 第73-74页 |
| 2.3.16 Colony PCR | 第74页 |
| 2.3.17 Plasmid extraction | 第74-76页 |
| 2.3.18 Transient Transfection | 第76-77页 |
| 2.3.19 Formation of Stable cells lines using lentivirus | 第77-78页 |
| 2.3.20 Stable transfection | 第78-79页 |
| 2.3.21 Cell viability | 第79页 |
| 2.3.22 Cell migration | 第79页 |
| 2.3.23 Western blotting | 第79-81页 |
| 2.4 RESULTS | 第81-89页 |
| 2.4.1 UVB Irradiation leads to Smad4 splicing into Smad4-B in Keratinocyte cell | 第81-82页 |
| 2.4.2 Transfection Transfection of pc DNA 3.1+, pc DNA3.1-Smad4-FL and pc DNA3.1-Smad4B into Ha Ca T cell lines | 第82-83页 |
| 2.4.3 Lentiviral systems | 第83-84页 |
| 2.4.4 Overexpression of Smad4F and Smad4B in stable Ha Ca T cell | 第84页 |
| 2.4.5 Stable transfection of GFP control, Smad4, and Smad4B isoform | 第84-85页 |
| 2.4.6 To detect the function of Smad4 F overexpression and Smad4 B isoform on cellproliferation | 第85-86页 |
| 2.4.7 To study pro-apoptotic and anti-apoptotic proteins by western blot | 第86-87页 |
| 2.4.8 To determine the effect of Smad4F Isoform Smad4 B on cell migration | 第87-89页 |
| 2.5 DISCUSSION | 第89-91页 |
| 2.6 CONCLUSION | 第91-93页 |
| CHAPTER 3 HNRNPA1 SPLICING FACTOR IS RESPONSIBLE IN UVB INDUCE ALTERNATIVE SPLICING OF SMAD4 IN HACATCELL | 第93-117页 |
| 3.1 INTRODUCTION | 第93-96页 |
| 3.2 MATERIALS AND METHODS | 第96-110页 |
| 3.2.1 The Major experimental equipment’s, utensils and supplies | 第96-98页 |
| 3.2.2 The main Laboratory reagents and consumables | 第98-100页 |
| 3.2.3 laboratory equipment, materials and reagents | 第100-103页 |
| 3.2.4 Cell culture | 第103页 |
| 3.2.5 UVB Irradiation | 第103-104页 |
| 3.2.6 Cell extraction | 第104页 |
| 3.2.7 RNA extraction and detection | 第104-105页 |
| 3.2.8 RNA reverse transcription | 第105-106页 |
| 3.2.9 Nested RT- PCR | 第106-107页 |
| 3.2.10 Western blotting | 第107-110页 |
| 3.3 RESULT | 第110-112页 |
| 3.3.1 Smad4 spliced to Smad4B in keratinocyte cells upon UVB irradiation | 第110-111页 |
| 3.3.2 Hn Rnp A1 splicing factor involved in Smad4F alternative splicing | 第111-112页 |
| 3.3.3 UVB regulate the expression of hn RNPA1 and SF2 | 第112页 |
| 3.4 DISCUSSION | 第112-115页 |
| 3.5 CONCLUSION | 第115-117页 |
| CHAPTER 4 CONCLUSIONS AND PERSPECTIVE | 第117-119页 |
| 4.1 CONCLUSIONS | 第117-118页 |
| 4.2 PERSPECTIVE | 第118-119页 |
| ACKNOWLEDGEMENT | 第119-121页 |
| REFERENCES | 第121-149页 |
| PUBLICATIONS | 第149页 |
