| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-42页 |
| 1.1 PTI模式分子的识别 | 第14-25页 |
| 1.1.1 细菌PAMP的识别 | 第15-18页 |
| 1.1.2 真菌PAMP的识别 | 第18-19页 |
| 1.1.3 卵菌PAMP的识别 | 第19-21页 |
| 1.1.4 寄主细胞状态变化(损伤相关的分子模式,DAMP)的识别 | 第21-23页 |
| 1.1.5 特征信号分子的跨界识别 | 第23-25页 |
| 1.2 经典PRR模式识别系统——FLS2和EFR | 第25-28页 |
| 1.3 PRR参与调控共生互作 | 第28-31页 |
| 1.4 PRR调控植物对环境因子变化的响应 | 第31-32页 |
| 1.5 PTI激活下游的信号转导事件以及细胞、生理反应 | 第32-40页 |
| 1.5.1 胞内钙离子浓度上升 | 第33-34页 |
| 1.5.2 胞外碱化和细胞膜去极化反应 | 第34页 |
| 1.5.3 活性氧迸发 | 第34-35页 |
| 1.5.4 细胞质类受体激酶激活 | 第35-36页 |
| 1.5.5 MAPK激活 | 第36-39页 |
| 1.5.6 小G蛋白激活 | 第39-40页 |
| 1.6 本课题的研究目的和意义 | 第40-42页 |
| 第二章 材料与方法 | 第42-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第42-44页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第42页 |
| 2.1.2 菌种 | 第42页 |
| 2.1.3 载体 | 第42-43页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第43-44页 |
| 2.2 实验方法 | 第44-57页 |
| 2.2.1 酵母双杂交实验 | 第44-45页 |
| 2.2.2 植物RNA提取、反转录和定量PCR | 第45-47页 |
| 2.2.3 重组蛋白诱导表达和纯化 | 第47-50页 |
| 2.2.4 Pulldown实验 | 第50-51页 |
| 2.2.5 蛋白质免疫印迹(Westernblot) | 第51-52页 |
| 2.2.6 蛋白磷酸化检测 | 第52-54页 |
| 2.2.7 植物组织总蛋白提取 | 第54页 |
| 2.2.8 Co-IP实验 | 第54页 |
| 2.2.9 MAPK活性检测 | 第54-55页 |
| 2.2.10 基因诱导表达处理 | 第55页 |
| 2.2.11 稻瘟病侵染实验 | 第55-56页 |
| 2.2.12 本氏烟农杆菌转化和病毒介导的基因沉默 | 第56-57页 |
| 第三章 结果 | 第57-106页 |
| 3.1 筛选与OsRLCK185互作的水稻MEKK1家族成员 | 第57-61页 |
| 3.2 OsRLCK185与OsMAPKKKε的互作验证 | 第61-66页 |
| 3.2.1 利用酵母双杂交实验验证OsRLCK185与OsMAPKKKε的互作 | 第61页 |
| 3.2.2 用体外Pulldown实验验证OsRLCK185与OsMAPKKKε的互作 | 第61-63页 |
| 3.2.3 用体内Co-IP实验验证OsRLCK185与OsMAPKKKε的互作 | 第63-66页 |
| 3.3 OsMAPKKKε的C端结构域负责与OsRLCK185互作 | 第66-69页 |
| 3.4 OsRLCK185磷酸化OsMAPKKKε | 第69-73页 |
| 3.4.1 OsRLCK185体外磷酸化OsMAPKKKε全长蛋白 | 第69-71页 |
| 3.4.2 OsRLCK185体外磷酸化OsMAPKKKε的C端结构域(aa769-1357) | 第71-72页 |
| 3.4.3 OsRLCK185体外磷酸化OsMAPKKKε的丝氨酸和苏氨酸 | 第72-73页 |
| 3.5 OsMAPKKKε能够与OsMKK4、OsMKK5互作 | 第73-76页 |
| 3.5.1 用酵母双杂交技术验证OsMAPKKKε与OsMKK4、OsMKK5互作 | 第73-74页 |
| 3.5.2 用Co-IP技术验证OsMAPKKKε与OsMKK4、OsMKK5互作 | 第74-76页 |
| 3.6 OsMAPKKKε能够磷酸化OsMKK | 第76-78页 |
| 3.6.1 体外磷酸化实验证明OsMAPKKKε能够磷酸化OsMKK | 第76-77页 |
| 3.6.2 用体内磷酸化实验证明OsMAPKKKε能够磷酸化OsMKK | 第77-78页 |
| 3.7 OsCERK1促进OsRLCK185与OsMAPKKKε的互作 | 第78-79页 |
| 3.8 OsCERK1体外促进OsRLCK185对OsMAPKKKε的磷酸化 | 第79-81页 |
| 3.9 烟草细胞中模拟磷酸化形式的OsRLCK185-3D与OsMAPKKKε共表达可以激活MAPK磷酸化 | 第81-83页 |
| 3.10 OsMAPKKKε沉默植株的MAPK响应几丁质能力减弱 | 第83-86页 |
| 3.10.1 OsMAPKKKε沉默水稻的MAPK响应几丁质能力减弱 | 第83-85页 |
| 3.10.2 NbMAPKKKε沉默本氏烟的MAPK响应几丁质能力减弱 | 第85-86页 |
| 3.11 OsMAPKKKε沉默植株对稻瘟抗病能力减弱 | 第86-88页 |
| 3.12 全长OsMAPKKKε能够在几丁质处理下激活MAPK级联反应 | 第88-89页 |
| 3.13 OsMAPKKKε激酶结构域组成型激活MAPK级联反应 | 第89-92页 |
| 3.13.1 在本氏烟系统里OsMAPKKKε激酶结构域能够组成型激活MAPK级联反应 | 第89-90页 |
| 3.13.2 在水稻体内OsMAPKKKε激酶结构域能够组成型激活MAPK级联反应 | 第90-92页 |
| 3.14 OsMAPKKKε激酶结构域在本氏烟叶片中激活细胞坏死并且C端结构域能够调控该表型 | 第92-94页 |
| 3.15 OsMAPKKKε激酶结构域组成型激活防卫相关基因表达 | 第94-95页 |
| 3.16 OsMAPKKKε激酶结构域组成性激活水稻对稻瘟抗病性 | 第95-96页 |
| 3.17 OsMAPKKKε在根茎叶中均有表达,其亚细胞定位有可能在细胞膜 | 第96-97页 |
| 3.18 OsRACK1A作为支架蛋白与MAPK级联通路互作 | 第97-99页 |
| 3.19 OsRLCK185与OsRac1在酵母双杂交系统中互作 | 第99页 |
| 3.20 在酵母双杂交系统中OsRLCK185与激活形式的OsRac1互作 | 第99-101页 |
| 3.21 OsRLCK185能够在体外磷酸化OsRac | 第101-102页 |
| 3.22 在酵母双杂交系统中OsMAPKKKε与失活形式的OsRac1互作 | 第102-103页 |
| 3.23 在酵母三杂交系统中激活形式的OsRac1能够抑制OsRLCK185与OsMAPKKKε的互作 | 第103-106页 |
| 第四章 讨论 | 第106-115页 |
| 4.1 OsRLCK185直接将OsCERK1识别的几丁质信号传递至OsMAPKKKε-OsMKK4/5-OsMPK3/6组成的MAPK级联通路模块 | 第106-107页 |
| 4.2 RLCK 和 MAPKKK 很可能具有冗余性 | 第107-110页 |
| 4.3 Os MAPKKKε 如何在几丁质识别抗病信号中发挥功能 | 第110-111页 |
| 4.4 小G蛋白OsRac1如何参与OsRLCK185-MAPK级联通路 | 第111-113页 |
| 4.5 RLCK 家族蛋白可能广谱介导植物 RLK 对配体信号识别与MAPK级联通路之间的联系 | 第113-115页 |
| 第五章 全文的总结、创新点与展望 | 第115-118页 |
| 5.1 全文总结 | 第115-116页 |
| 5.2 创新点 | 第116页 |
| 5.3 展望 | 第116-118页 |
| 参考文献 | 第118-136页 |
| 附录 | 第136-147页 |
| 1 经过密码子优化后的OsMAPKKKε序列 | 第136-137页 |
| 2 引物列表 | 第137-147页 |
| 作者简历及在学期间所取得的科研成果 | 第147-148页 |
| 致谢 | 第148-150页 |
