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与紫云英转脂蛋白AsE246及共生受体激酶NORK相互作用蛋白的筛选

摘要第6-8页
ABSTRACT第8-9页
缩略语表第10-11页
1 前言第11-33页
    1.1 生物固氮第11-17页
        1.1.1 生物固氮的方式第11页
        1.1.2 豆科植物与根瘤菌的共生固氮体系第11-13页
        1.1.3 参与共生固氮的根瘤菌基因第13-14页
        1.1.4 参与共生固氮的植物基因第14-17页
    1.2 参与共生固氮的蛋白家族第17-25页
        1.2.1 LTP(Lipid Transfer Protein)家族第18-21页
        1.2.2 DnaJ蛋白家族第21-23页
        1.2.3 植物受体蛋白激酶第23-24页
        1.2.4 CCP蛋白家族第24-25页
    1.3 研究蛋白互作所涉及的技术第25-28页
        1.3.1 酵母双杂交系统第25-27页
        1.3.2 其他蛋白互作技术第27页
        1.3.3 荧光定量PCR技术(Real time fluorescence quantitative PCR)第27-28页
    1.4 紫云英共生固氮相关基因的研究进展第28-30页
    1.5 研究的目的及意义第30-33页
2 材料与方法第33-49页
    2.1 材料第33-40页
        2.1.1 植物材料第33页
        2.1.2 菌株、质粒与引物第33-36页
        2.1.3 培养基与营养液第36-37页
        2.1.4 缓冲液、贮存液和反应试剂第37-39页
        2.1.5 主要分子生物学试剂第39页
        2.1.6 主要耗材及使用仪器设备第39-40页
    2.2 方法第40-49页
        2.2.1 基本分子生物学方法第40页
        2.2.2 紫云英总RNA的抽提及纯化第40-41页
        2.2.3 RT-PCR和荧光定量PCR第41-42页
        2.2.4 AsDJL1基因5'端的扩增第42-43页
        2.2.5 酵母双杂交有关实验第43-47页
        2.2.6 蛋白的诱导表达第47-49页
3 结果与分析第49-78页
    3.1 紫云英根瘤总RNA的抽提及AD-cDNA文库的检测第49-50页
        3.1.1 紫云英根瘤总RNA的抽提及检测第49页
        3.1.2 AD-cDNA文库的检测第49-50页
    3.2 转脂蛋白AsE246相互作用的蛋白的筛选及初步鉴定第50-70页
        3.2.1 pGBKT7-AsE246诱饵质粒的构建第50-51页
        3.2.2 pGBKT7-AsE246诱饵质粒的检测第51-52页
        3.2.3 诱饵菌株钓取文库AD-cDNA及阳性克隆子的筛选第52-53页
        3.2.4 阳性克隆的进一步验证第53-55页
        3.2.5 阳性克隆pGADT7-cDNA文库质粒测序和分析第55-58页
        3.2.6 目标基因AsDJL1的时空表达特征研究第58-66页
        3.2.7 靶基因AsDJL1的同源扩增第66-68页
        3.2.8 目的基因表达载体的构建及蛋白的诱导第68-70页
        3.2.9 AsE246与其他蛋白的相互作用第70页
    3.3 紫云英共生受体激酶NORK相互作用蛋白的筛选第70-77页
        3.3.1 BD-NORK-PK及BD-NORK-LRR的构建与检测第71-72页
        3.3.2 诱饵菌株与文库菌株配合筛选阳性克隆第72-73页
        3.3.3 阳性克隆子测序分析第73-77页
    3.4 蛋白之间相互作用的初步检测第77-78页
4 总结与讨论第78-82页
    4.1 AsE246相互作用蛋白总结与讨论第78-80页
    4.2 NORK-PK、NORK-LRR相互作用蛋白的总结与讨论第80-81页
    4.3 进一步的实验设想第81-82页
参考文献第82-94页
致谢第94-95页
论文发表情况第95-96页
附录第96-97页

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