| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-12页 |
| 第一章 CDK9 基因研究进展 | 第12-21页 |
| ·CDK9 的结构与功能 | 第12-13页 |
| ·CDK9/CyclinT 复合物在RNA 聚合酶Ⅱ转录延伸中的作用 | 第13-15页 |
| ·CDK9(P-TEFb)的活性调控方式 | 第15-16页 |
| ·细胞周期蛋白激酶抑制剂 | 第16-18页 |
| ·CDK9(CyclinT1-CDK9)在病理过程中的功能 | 第18-20页 |
| ·CDK9 与肿瘤 | 第18页 |
| ·CDK9 与HIV-1 感染 | 第18-19页 |
| ·CDK9 与心肌肥大 | 第19-20页 |
| ·本课题研究的目标、内容和意义 | 第20-21页 |
| 第二章 表达序列标签（EST）在新基因克隆中的应用 | 第21-24页 |
| ·EST 概述 | 第21页 |
| ·EST 技术的应用 | 第21-22页 |
| ·EST 与新基因识别 | 第21-22页 |
| ·SNP 的发现 | 第22页 |
| ·EST 数据库介绍 | 第22页 |
| ·基于EST 数据库的电子克隆技术路线 | 第22-24页 |
| 第三章 猪CDK9 基因的克隆与生物信息学分析 | 第24-37页 |
| ·材料 | 第24-25页 |
| ·样品来源 | 第24页 |
| ·主要试剂 | 第24页 |
| ·菌株及载体 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·主要试剂配方 | 第25页 |
| ·数据库网站和分析软件 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-31页 |
| ·猪CDK9 基因的电子克隆 | 第25-26页 |
| ·CDK9 基因的分子克隆 | 第26-30页 |
| ·CDK9 蛋白系统发生进化关系分析 | 第30页 |
| ·猪CDK9 基因序列结构与生物信息学分析 | 第30-31页 |
| ·结果 | 第31-35页 |
| ·猪CDK9 基因电子克隆结果 | 第31页 |
| ·猪CDK9 基因的RT-PCR 扩增 | 第31-32页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定结果 | 第32页 |
| ·重组质粒的测序鉴定结果 | 第32-33页 |
| ·CDK9 基因外显子分析 | 第33-34页 |
| ·CDK9 蛋白系统发生进化关系分析 | 第34页 |
| ·CDK9 蛋白结构特点、功能区的分析 | 第34-35页 |
| ·讨论 | 第35-36页 |
| ·小结 | 第36-37页 |
| 第四章 猪CDK9 基因在SUVEC 细胞中的表达 | 第37-49页 |
| ·材料 | 第37-38页 |
| ·菌株、质粒及细胞株 | 第37-38页 |
| ·主要试剂、工具酶和耗材 | 第38页 |
| ·主要仪器与设备 | 第38页 |
| ·试剂配制 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-43页 |
| ·猪CDK9 重组克隆载体的构建 | 第38-40页 |
| ·CDK9 基因重组真核表达质粒的构建 | 第40页 |
| ·猪血管内皮细胞的培养 | 第40-41页 |
| ·脂质体介导的真核细胞转染 | 第41-42页 |
| ·Western Blot | 第42-43页 |
| ·细胞周期的检测 | 第43页 |
| ·统计分析 | 第43页 |
| ·实验结果 | 第43-47页 |
| ·CDK9 基因的PCR 扩增 | 第43-44页 |
| ·CDK9 基因重组克隆载体质粒的构建结果 | 第44页 |
| ·真核表达质粒pEGFP-CDK9 的鉴定 | 第44页 |
| ·转染后48 h 荧光显微镜观察 | 第44-45页 |
| ·pEGFP-CDK9 蛋白的western blot 检测 | 第45-46页 |
| ·CDK9 基因过表达对细胞周期的影响 | 第46-47页 |
| ·讨论 | 第47-48页 |
| ·小结 | 第48-49页 |
| 第五章 猪CDK9 基因在大肠杆菌中的表达 | 第49-57页 |
| ·材料 | 第49-50页 |
| ·菌株和载体 | 第49页 |
| ·主要试剂和工具酶 | 第49页 |
| ·主要仪器 | 第49页 |
| ·主要试剂配制 | 第49-50页 |
| ·方法 | 第50-53页 |
| ·猪CDK9 基因的TA 克隆与鉴定 | 第50-51页 |
| ·猪CDK9 基因的原核表达载体的构建与鉴定 | 第51-52页 |
| ·猪CDK9 基因在大肠杆菌中的诱导表达 | 第52页 |
| ·SDS-PAGE 分析表达产物 | 第52-53页 |
| ·结果 | 第53-55页 |
| ·猪CDK9 基因的克隆与鉴定 | 第53页 |
| ·猪CDK9 基因克隆载体构建结果 | 第53-54页 |
| ·猪CDK9 基因原核表达载体质粒的构建结果 | 第54页 |
| ·重组质粒pET-CDK9 原核表达产物的 SDS-PAGE 检测结果 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·猪CDK9 融合蛋白的表达特点 | 第55页 |
| ·表达条件的优化 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 致谢 | 第64-65页 |
| 作者简介 | 第65页 |
