| 摘要 | 第6-8页 |
| abstract | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第14-25页 |
| 第一章 甲基乙二醛与Sirtuin 1 | 第14-21页 |
| 1.1 甲基乙二醛的来源与降解 | 第14-15页 |
| 1.1.1 甲基乙二醛的来源 | 第14-15页 |
| 1.1.2 甲基乙二醛的降解 | 第15页 |
| 1.2 甲基乙二醛诱导羰基应激和氧化应激 | 第15-18页 |
| 1.2.1 甲基乙二醛诱导羰基应激 | 第15-17页 |
| 1.2.2 甲基乙二醛诱导氧化应激 | 第17-18页 |
| 1.3 甲基乙二醛导致胰岛素抵抗及其机制 | 第18-21页 |
| 1.3.1 胰岛素抵抗 | 第18-19页 |
| 1.3.1.1 胰岛素抵抗的影响因素 | 第18-19页 |
| 1.3.1.2 甲基乙二醛导致胰岛素抵抗 | 第19页 |
| 1.3.2 Sirtuin 1 影响胰岛素抵抗 | 第19-21页 |
| 1.3.2.1 Sirtuin 1 的生理功能 | 第19-20页 |
| 1.3.2.2 Sirtuin 1 的活性调节机制 | 第20-21页 |
| 第二章 组蛋白乙酰化影响Sirtuin 1 活性 | 第21-25页 |
| 2.1 组蛋白乙酰化 | 第21-25页 |
| 2.1.1 表观遗传修饰 | 第21-23页 |
| 2.1.1.1 DNA甲基化与microRNA调控 | 第21页 |
| 2.1.1.2 组蛋白修饰 | 第21-22页 |
| 2.1.1.3 组蛋白乙酰化的研究进展 | 第22页 |
| 2.1.1.4 组蛋白乙酰化的影响因素 | 第22-23页 |
| 2.1.2 组蛋白乙酰化影响Sirtuin 1 活性 | 第23-25页 |
| 2.1.2.1 组蛋白乙酰化调节NAMPT蛋白水平 | 第23-24页 |
| 2.1.2.2 NAMPT蛋白水平影响Sirtuin 1 活性 | 第24-25页 |
| 研究假设 | 第25-26页 |
| 试验研究 | 第26-51页 |
| 第三章 甲基乙二醛加成组蛋白H3合成肽段的赖氨酸位点 | 第26-31页 |
| 3.1 试验材料与仪器 | 第26页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第26页 |
| 3.1.2 试验仪器 | 第26页 |
| 3.1.3 主要试剂及配制 | 第26页 |
| 3.2 试验方法 | 第26-27页 |
| 3.2.1 加成反应体系构建 | 第26-27页 |
| 3.2.2 加成反应液的脱盐纯化 | 第27页 |
| 3.2.3 Q-Exactive质谱检测肽段加成情况 | 第27页 |
| 3.3 试验结果 | 第27-30页 |
| 3.3.1 甲基乙二醛加成组蛋白H3合成肽段的赖氨酸残基 | 第27-30页 |
| 3.4 讨论 | 第30页 |
| 3.5 小结 | 第30-31页 |
| 第四章 甲基乙二醛抑制小牛胸腺组蛋白H3K14乙酰化 | 第31-41页 |
| 4.1 试验材料与仪器 | 第31-33页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第31页 |
| 4.1.2 试验仪器 | 第31-33页 |
| 4.2 试验方法 | 第33-36页 |
| 4.2.1 小牛胸腺核蛋白和组蛋白的提取 | 第33-34页 |
| 4.2.1.1 小牛胸腺核蛋白的提取 | 第33-34页 |
| 4.2.1.2 小牛胸腺组蛋白的提取 | 第34页 |
| 4.2.2 BCA法定量核蛋白和组蛋白 | 第34页 |
| 4.2.3 Western blot鉴定组蛋白H3 | 第34页 |
| 4.2.4 组蛋白乙酰转移酶的粗提取 | 第34-35页 |
| 4.2.4.1 BRL-3A细胞的复苏 | 第34-35页 |
| 4.2.4.2 BRL-3A细胞的传代 | 第35页 |
| 4.2.4.3 BRL-3A细胞的收集 | 第35页 |
| 4.2.4.4 组蛋白乙酰转移酶的粗提取 | 第35页 |
| 4.2.5 核蛋白和组蛋白乙酰化模型的构建 | 第35页 |
| 4.2.6 Western blot检测核蛋白和组蛋白乙酰化水平 | 第35页 |
| 4.2.7 核蛋白非酶糖基化模型的构建 | 第35页 |
| 4.2.8 DNPH法检测非酶糖基化产物Schiff base的生成 | 第35-36页 |
| 4.2.9 数据分析 | 第36页 |
| 4.3 试验结果 | 第36-39页 |
| 4.3.1 小牛胸腺核蛋白和组蛋白的提取和蛋白定量结果 | 第36-37页 |
| 4.3.1.1 小牛胸腺核蛋白和组蛋白的提取 | 第36页 |
| 4.3.1.2 BCA法定量核蛋白和组蛋白 | 第36-37页 |
| 4.3.2 组蛋白H3的鉴定结果 | 第37页 |
| 4.3.3 甲基乙二醛抑制核蛋白和组蛋白H3K14的乙酰化 | 第37-38页 |
| 4.3.4 甲基乙二醛促进非酶糖基化产物Schiff base的产生 | 第38-39页 |
| 4.4 讨论 | 第39-40页 |
| 4.5 小结 | 第40-41页 |
| 第五章 甲基乙二醛降低BRL-3A细胞的Sirtuin 1 活性 | 第41-51页 |
| 5.1 试验材料与仪器 | 第41-43页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第41页 |
| 5.1.2 试验仪器 | 第41-43页 |
| 5.2 试验方法 | 第43-45页 |
| 5.2.1 BRL-3A细胞培养 | 第43页 |
| 5.2.1.1 BRL-3A细胞的复苏 | 第43页 |
| 5.2.1.2 BRL-3A细胞的传代 | 第43页 |
| 5.2.1.3 BRL-3A细胞的冻存 | 第43页 |
| 5.2.2 MTT法测BRL-3A细胞活力 | 第43-44页 |
| 5.2.3 Western blot检测BRL-3A细胞H3K14乙酰化水平 | 第44页 |
| 5.2.3.1 BRL-3A细胞培养 | 第44页 |
| 5.2.3.2 BRL-3A细胞核蛋白样品的制备 | 第44页 |
| 5.2.3.3 Western blot检测H3K14乙酰化水平 | 第44页 |
| 5.2.4 Western blot检测NAMPT蛋白水平 | 第44页 |
| 5.2.4.1 BRL-3A细胞培养 | 第44页 |
| 5.2.4.2 BRL-3A细胞蛋白样品的制备 | 第44页 |
| 5.2.4.3 Western blot检测NAMPT蛋白水平 | 第44页 |
| 5.2.5 荧光法测酶活性 | 第44-45页 |
| 5.2.5.1 BRL-3A细胞培养 | 第44页 |
| 5.2.5.2 BRL-3A细胞收集 | 第44-45页 |
| 5.2.5.3 Sirtuin 1 的粗提取 | 第45页 |
| 5.2.5.4 Sirtuin 1 活性测定 | 第45页 |
| 5.2.6 数据分析 | 第45页 |
| 5.3 试验结果 | 第45-48页 |
| 5.3.1 甲基乙二醛的细胞毒性 | 第45-46页 |
| 5.3.2 甲基乙二醛降低BRL-3A细胞H3K14乙酰化水平 | 第46-47页 |
| 5.3.3 甲基乙二醛降低BRL-3A细胞NAMPT蛋白水平 | 第47-48页 |
| 5.3.4 甲基乙二醛降低BRL-3A细胞Sirtuin 1 活性 | 第48页 |
| 5.4 讨论 | 第48-50页 |
| 5.5 小结 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 作者简介 | 第63页 |
