| 提要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 引言 | 第11-21页 |
| 第一部分 miRNA-320d在贲门癌组织中的表达及临床意义 | 第21-29页 |
| 前言 | 第21页 |
| 1. 材料和来源 | 第21页 |
| 2. 主要实验试剂和仪器 | 第21-22页 |
| 2.1 主要实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第22页 |
| 3. 实验方法 | 第22-24页 |
| 3.1 样本总RNA的制备 | 第22-23页 |
| 3.2 cDNA第一链合成 | 第23页 |
| 3.3 miRNA320d基因目的片段的扩增 | 第23-24页 |
| 4 统计学分析 | 第24页 |
| 结果 | 第24-26页 |
| 1 30例配对贲门癌及癌旁组织中miRNA-320d核酸水平表达情况 | 第24页 |
| 2 贲门癌组织中miRNA-320d相对表达情况与临床资料间的关系 | 第24-26页 |
| 讨论 | 第26-28页 |
| 结论 | 第28-29页 |
| 第二部分 贲门癌miRNA-320d/FoxM1调控关系的确立 | 第29-52页 |
| 前言 | 第29页 |
| 1. 材料和来源 | 第29-30页 |
| 1.1 贲门癌组织标本 | 第29-30页 |
| 1.2 细胞株 | 第30页 |
| 2. 主要实验试剂和仪器 | 第30-32页 |
| 2.1 主要实验试剂和质粒 | 第30-31页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第31页 |
| 2.3 常见溶液配方 | 第31-32页 |
| 3. 实验方法 | 第32-41页 |
| 3.1 细胞培养 | 第32-34页 |
| 3.2 受miRNA-320d调控的基因预测兙俥 | 第34页 |
| 3.3 慢病毒介导的稳定表达miR-320d的人贲门癌OE-19细胞系,稳定敲除miR-320d的人贲门癌SK-GT2细胞系的建立 | 第34-35页 |
| 3.4 荧光素酶报告基因实验验证FoxM1是miRNA-320d的靶基因兙俥 | 第35-36页 |
| 3.5 Quantitative real-time PCR (qRT-PCR)检测FoxM1 mRNA水平在贲门癌组织和细胞的表达 | 第36-38页 |
| 3.6 免疫组化S-P法检测FoxM1蛋白的表达 | 第38-39页 |
| 3.7 Western blot检测FoxM1蛋白的表达 | 第39-41页 |
| 4. 统计学分析 | 第41页 |
| 结果 | 第41-50页 |
| 1. miRNA-320d调控表达的目标基因预测分析 | 第41-43页 |
| 2. FoxM1在贲门癌中的表达及其与miR-320d的相关性 | 第43-44页 |
| 2.1 FoxM1在贲门癌组织中mRNA水平表达情况 | 第43页 |
| 2.2 FoxM1在贲门癌组织中蛋白水平表达情况 | 第43-44页 |
| 3. FoxM1在贲门癌组织中的表达与临床病理参数的相关性研究 | 第44-45页 |
| 4. FoxM1在贲门癌中的表达水平与患者生存期之间的关系 | 第45-46页 |
| 5. 转染miRNA-320d的mimics、inhibitor对贲门癌细胞FoxM1蛋白表达的影响 | 第46-48页 |
| 6. 在贲门癌细胞中miRNA-320d直接结合FoxM1的3'UTR区并对其进行调控 | 第48-50页 |
| 讨论 | 第50-51页 |
| 结论 | 第51-52页 |
| 第三部分 miRNA-320d/FoxM1调控关系对人贲门癌细胞功能的影响 | 第52-69页 |
| 前言 | 第52页 |
| 1. 材料和来源 | 第52页 |
| 1.1 细胞株 | 第52页 |
| 2. 主要实验试剂和仪器 | 第52-55页 |
| 2.1 主要实验试剂和质粒 | 第52-54页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第54页 |
| 2.3 常见溶液配方 | 第54-55页 |
| 3. 实验方法 | 第55-63页 |
| 3.1 细胞培养 | 第55-56页 |
| 3.2 受miRNA-320d调控的基因预测 | 第56-57页 |
| 3.3 慢病毒介导的稳定表达miR-320d的人贲门癌OE-19细胞系,稳定敲除miR-320d的人贲门癌SK-GT2细胞系的建立 | 第57页 |
| 3.4 Quantitative real-time PCR (qRT-PCR)检测miRNA-320d和FoxM1 mRNA水平在细胞的表达 | 第57-59页 |
| 3.5 Western blot检测FoxM1蛋白的表达 | 第59-61页 |
| 3.6 细胞增殖检测 | 第61-62页 |
| 3.7 Transwell迁移实验 | 第62页 |
| 3.8 细胞划痕实验 | 第62-63页 |
| 4 统计分析 | 第63页 |
| 结果 | 第63-68页 |
| 讨论 | 第68页 |
| 结论 | 第68-69页 |
| 第四部分 MiRNA-320d/FoxM1调控关系对裸鼠贲门癌生长的影响 | 第69-84页 |
| 前言 | 第69页 |
| 1. 材料和来源 | 第69页 |
| 1.1 细胞株和实验动物 | 第69页 |
| 2. 主要实验试剂和仪器 | 第69-72页 |
| 2.1 主要实验试剂和质粒 | 第69-70页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第70-71页 |
| 2.3 常见溶液配方 | 第71-72页 |
| 3. 实验方法 | 第72-79页 |
| 3.1 细胞培养 | 第72-73页 |
| 3.2 裸鼠饲养 | 第73页 |
| 3.3 瘤细胞接种 | 第73页 |
| 3.4 观察、测量及计算方法 | 第73-74页 |
| 3.5 裸鼠处死及标本收集 | 第74页 |
| 3.6 Quantitative real-time PCR (qRT-PCR)检测FoxM1 mRNA水平在贲门癌组织和细胞的表达 | 第74-76页 |
| 3.7 免疫组化S-P法检测FoxM1蛋白的表达 | 第76-77页 |
| 3.8 Western blot检测FoxM1蛋白的表达 | 第77-79页 |
| 4 统计分析 | 第79页 |
| 结果 | 第79-82页 |
| 讨论 | 第82-83页 |
| 结论 | 第83-84页 |
| 第五部分 槐定碱下调FoxM1在贲门癌中的增殖、凋亡研究 | 第84-100页 |
| 前言 | 第84页 |
| 1. 材料和来源 | 第84页 |
| 2. 主要实验试剂和仪器 | 第84-87页 |
| 2.1 主要实验试剂和质粒 | 第84-85页 |
| 2.2 主要实验仪器 | 第85-86页 |
| 2.3 常见溶液配方兙俥 | 第86-87页 |
| 3. 实验方法 | 第87-94页 |
| 3.1 细胞培养 | 第87-88页 |
| 3.2 受miRNA-320d调控的基因预测 | 第88页 |
| 3.3 慢病毒介导的稳定表达miR-320d的人贲门癌OE-19细胞系,稳定敲除miR-320d的人贲门癌SK-GT2细胞系的建立 | 第88-89页 |
| 3.4 Quantitative real-time PCR (qRT-PCR)检测miRNA-320d和FoxM1 mRNA水平在细胞的表达 | 第89-91页 |
| 3.5 Westen blot检测FoxM1蛋白的表达 | 第91-93页 |
| 3.6 槐定碱对细胞增殖影响的检测 | 第93页 |
| 3.7 槐定碱对肿瘤细胞凋亡的影响 | 第93-94页 |
| 3.8 槐定碱对细胞内部ROS和GSH含量的影响 | 第94页 |
| 3.9 槐定碱对FoxM1的转录调控 | 第94页 |
| 4 统计分析 | 第94-95页 |
| 结果 | 第95-98页 |
| 讨论 | 第98-99页 |
| 结论 | 第99-100页 |
| 结语 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-108页 |
| 综述 | 第108-120页 |
| 参考文献 | 第115-120页 |
| 附录 | 第120-121页 |
| 致谢 | 第121-123页 |
| 查新报告 | 第123-131页 |
| 发表论文 | 第131-132页 |
| 附件 | 第132-151页 |
