| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 1 引言 | 第8-15页 |
| ·原核表达系统的研究进展 | 第8-10页 |
| ·原核表达系统概述 | 第8页 |
| ·原核表达载体的选择 | 第8页 |
| ·目的基因的选择 | 第8-9页 |
| ·宿主菌的选择 | 第9-10页 |
| ·乳腺上皮细胞体外培养研究状况 | 第10-12页 |
| ·细胞体外培养技术 | 第10-11页 |
| ·牛乳腺上皮细胞的体外培养 | 第11-12页 |
| ·Western 印迹分析法 | 第12-13页 |
| ·立题依据及研究目的意义 | 第13-15页 |
| 2 实验一 LacS 原核表达载体的构建、蛋白纯化与多抗的制备 | 第15-32页 |
| ·材料 | 第15-17页 |
| ·主要实验器材 | 第15-16页 |
| ·实验试剂 | 第16页 |
| ·载体 | 第16页 |
| ·菌种 | 第16页 |
| ·实验用试剂的配方 | 第16-17页 |
| ·方法 | 第17-26页 |
| ·引物的设计与合成 | 第17页 |
| ·目的基因的 PCR 扩增 | 第17-18页 |
| ·克隆载体的构建 | 第18-20页 |
| ·PCR 产物和pMD19-T 载体的连接 | 第18页 |
| ·感受态细胞 DH5α的制备 | 第18-19页 |
| ·转化感受态细胞 DH5α | 第19页 |
| ·菌落 PCR 鉴定阳性克隆 | 第19页 |
| ·阳性克隆摇菌提质粒酶切鉴定 | 第19-20页 |
| ·表达载体的构建 | 第20-24页 |
| ·双酶切质粒pASK-IBA2 及克隆载体pMD19-T-LacS | 第20-21页 |
| ·重组质粒pASK-IBA2-LacS 的构建 | 第21-23页 |
| ·感受态细胞rosseta 的制备 | 第23页 |
| ·连接产物转化感受态大肠杆菌rosseta | 第23页 |
| ·菌落 PCR 鉴定阳性克隆 | 第23页 |
| ·阳性克隆摇菌提质粒酶切鉴定 | 第23-24页 |
| ·重组表达质粒在大肠杆菌中的诱导表达 | 第24页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第24-25页 |
| ·兔抗 LacS 多克隆抗体的制备 | 第25-26页 |
| ·结果 | 第26-30页 |
| ·目的基因 LacS 扩增 | 第26页 |
| ·克隆载体的鉴定 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27-29页 |
| ·重组蛋白的 SDS-PAGE 鉴定 | 第29页 |
| ·多抗的 ELISA 效价及 WB 检测结果 | 第29-30页 |
| ·讨论 | 第30-32页 |
| 3 实验二牛乳腺上皮细胞的分离培养与鉴定 | 第32-41页 |
| ·材料 | 第32-33页 |
| ·主要仪器设备 | 第32页 |
| ·主要试剂 | 第32页 |
| ·活体材料 | 第32-33页 |
| ·方法 | 第33-35页 |
| ·牛乳腺上皮细胞的分离培养与纯化 | 第33-34页 |
| ·牛乳腺上皮细胞冻存和复苏培养 | 第34页 |
| ·乳腺上皮细胞生长曲线的绘制 | 第34页 |
| ·乳腺上皮细胞染色体分析 | 第34-35页 |
| ·荧光免疫细胞染色法鉴定乳腺上皮细胞 | 第35页 |
| ·结果 | 第35-39页 |
| ·牛乳腺上皮细胞的分离、培养和纯化 | 第35-37页 |
| ·乳腺上皮细胞的解冻复苏培养 | 第37页 |
| ·乳腺上皮细胞生长曲线的绘制 | 第37-38页 |
| ·乳腺上皮细胞染色体分析 | 第38页 |
| ·荧光免疫细胞染色分析细胞角蛋白 K14 和 K15 的表达 | 第38-39页 |
| ·讨论 | 第39-41页 |
| 4 实验三 Western blotting 检测牛乳腺上皮细胞 LacS 表达情况 | 第41-45页 |
| ·材料 | 第41-42页 |
| ·主要实验器材 | 第41页 |
| ·实验试剂 | 第41页 |
| ·实验材料 | 第41页 |
| ·主要溶液配方 | 第41-42页 |
| ·方法 | 第42-43页 |
| ·乳腺上皮细胞总蛋白的提取 | 第42页 |
| ·Western blotting 检测LacS | 第42-43页 |
| ·结果 | 第43页 |
| ·讨论 | 第43-45页 |
| 致谢 | 第45-46页 |
| 参考文献 | 第46-49页 |
| 作者简介 | 第49页 |
