| 中文摘要 | 第3-6页 |
| 英文摘要 | 第6-9页 |
| 英汉缩略名词对照表 | 第15-17页 |
| 1 绪论 | 第17-29页 |
| 1.1 问题的提出 | 第17-18页 |
| 1.2 国内外研究背景 | 第18-26页 |
| 1.2.1 骨髓间充质干细胞（BMSCs）的生物学性能 | 第18页 |
| 1.2.2 骨桥蛋白与细胞迁移 | 第18-19页 |
| 1.2.3 细胞核在细胞迁移中的作用 | 第19-26页 |
| 1.3 本文研究目的、意义及主要内容 | 第26-29页 |
| 1.3.1 本文研究目的及意义 | 第26页 |
| 1.3.2 本文研究的内容 | 第26-27页 |
| 1.3.3 技术路线 | 第27-29页 |
| 2 大鼠BMSCs的分离、培养和鉴定 | 第29-35页 |
| 2.1 引言 | 第29页 |
| 2.2 实验材料 | 第29-30页 |
| 2.2.1 主要仪器设备及耗材 | 第29-30页 |
| 2.2.2 实验试剂与药品 | 第30页 |
| 2.2.3 实验动物 | 第30页 |
| 2.2.4 主要实验试剂的配制 | 第30页 |
| 2.3 实验方法 | 第30-32页 |
| 2.3.1 BMSCs原代分离 | 第30-31页 |
| 2.3.2 BMSCs传代培养、冻存及复苏 | 第31页 |
| 2.3.3 BMSCs表面抗原分析 | 第31-32页 |
| 2.4 实验结果 | 第32-33页 |
| 2.4.1 BMSCs的形态学观察 | 第32页 |
| 2.4.2 BMSCs表面抗原表达情况 | 第32-33页 |
| 2.5 讨论 | 第33-34页 |
| 2.6 本章小结 | 第34-35页 |
| 3 OPN对BMSCs细胞核杨氏模量的影响 | 第35-45页 |
| 3.1 引言 | 第35-36页 |
| 3.2 实验材料 | 第36-37页 |
| 3.2.1 主要设备、耗材 | 第36页 |
| 3.2.2 主要药品与试剂 | 第36-37页 |
| 3.2.3 主要实验试剂的配制 | 第37页 |
| 3.3 实验方法 | 第37-40页 |
| 3.3.1 Transwell迁移实验 | 第37-38页 |
| 3.3.2 MTS测量 | 第38页 |
| 3.3.3 细胞核提取 | 第38-39页 |
| 3.3.4 原子力显微镜测量细胞核杨氏模量 | 第39-40页 |
| 3.4 实验结果 | 第40-42页 |
| 3.4.1 OPN对BMSCs迁移能力的影响 | 第40-41页 |
| 3.4.2 OPN通过降低BMSCs细胞核硬度促进细胞迁移 | 第41-42页 |
| 3.5 分析讨论 | 第42-43页 |
| 3.6 本章小结 | 第43-45页 |
| 4. Lamin A/C在OPN促BMSCs迁移中的作用 | 第45-69页 |
| 4.1 引言 | 第45页 |
| 4.2 实验材料 | 第45-49页 |
| 4.2.1 主要仪器、耗材 | 第45-46页 |
| 4.2.2 主要实验药品与试剂 | 第46-48页 |
| 4.2.3 主要实验试剂的配制 | 第48-49页 |
| 4.3 实验方法 | 第49-62页 |
| 4.3.1 Real-time PCR检测lamin A/C基因的表达 | 第49-52页 |
| 4.3.2 Western blot实验 | 第52-54页 |
| 4.3.3 MTS测量 | 第54页 |
| 4.3.4 Lamin A/C过表达载体构建及鉴定 | 第54-59页 |
| 4.3.5 Lamin A/C shRNA载体构建及鉴定 | 第59-60页 |
| 4.3.6 质粒的扩增及提取 | 第60-61页 |
| 4.3.7 慢病毒的包装及感染 | 第61-62页 |
| 4.3.8 Transwell迁移实验 | 第62页 |
| 4.4 实验结果 | 第62-67页 |
| 4.4.1 OPN对细胞核骨架蛋白Lamin A/C表达的影响 | 第62-63页 |
| 4.4.2 Lamin A/C过表达载体的构建及鉴定 | 第63-64页 |
| 4.4.3 Lamin A/C shRNA载体的构建及鉴定 | 第64-65页 |
| 4.4.4 Lamin A/C过表达对BMSCs细胞核硬度及迁移的影响 | 第65-66页 |
| 4.4.5 Lamin A/C敲减对BMSCs细胞核硬度及迁移的影响 | 第66-67页 |
| 4.5 分析讨论 | 第67-68页 |
| 4.5.1 细胞核骨架蛋白Lamin A/C对细胞核硬度的影响 | 第67页 |
| 4.5.2 细胞核骨架蛋白Lamin A/C对细胞迁移的影响 | 第67-68页 |
| 4.6 本章小结 | 第68-69页 |
| 5 染色质结构变化在OPN促BMSCs迁移中的作用 | 第69-87页 |
| 5.1 引言 | 第69-70页 |
| 5.2 实验材料 | 第70-73页 |
| 5.2.1 主要仪器、耗材 | 第70页 |
| 5.2.2 主要实验试剂 | 第70-71页 |
| 5.2.3 主要实验试剂的配制 | 第71-73页 |
| 5.3 实验方法 | 第73-75页 |
| 5.3.1 细胞核提取 | 第73页 |
| 5.3.2 原子力显微镜测量细胞核杨氏模量 | 第73页 |
| 5.3.3 Real-time PCR检测 | 第73页 |
| 5.3.4 Western blot实验 | 第73页 |
| 5.3.5 免疫荧光染色 | 第73-74页 |
| 5.3.6 原位DNaseI敏感性实验 | 第74页 |
| 5.3.7 MTS测量 | 第74页 |
| 5.3.8 构建EZH2沉默载体 | 第74-75页 |
| 5.3.9 慢病毒的包装及感染 | 第75页 |
| 5.3.10 Transwell迁移实验 | 第75页 |
| 5.4 实验结果 | 第75-82页 |
| 5.4.1 染色质结构影响BMSCs细胞核力学特性和细胞迁移 | 第75-77页 |
| 5.4.2 诱导迁移能增加染色质的凝集 | 第77-78页 |
| 5.4.3 诱导迁移能增加异染色质标志物的水平 | 第78-79页 |
| 5.4.4 诱导细胞迁移能增加甲基化转移酶EZH2的表达水平 | 第79-80页 |
| 5.4.5 抑制甲基化转移酶EZH2的表达降低细胞迁移能力 | 第80-81页 |
| 5.4.6 EZH2 shRNA载体的构建及鉴定 | 第81-82页 |
| 5.4.7 敲减EZH2抑制BMSC迁移 | 第82页 |
| 5.5 分析讨论 | 第82-85页 |
| 5.5.1 染色质凝集与细胞迁移 | 第82-83页 |
| 5.5.2 异染色质与细胞迁移 | 第83-84页 |
| 5.5.3 Lamin A/C与染色质共同决定细胞硬度 | 第84-85页 |
| 5.6 本章小结 | 第85-87页 |
| 6 OPN促BMSCs迁移中细胞核与细胞骨架的相互作用 | 第87-97页 |
| 6.1 引言 | 第87-88页 |
| 6.2 实验材料 | 第88-89页 |
| 6.2.1 主要仪器、耗材 | 第88页 |
| 6.2.2 主要实验药品与试剂 | 第88-89页 |
| 6.2.3 主要实验试剂的配制 | 第89页 |
| 6.3 实验方法 | 第89-90页 |
| 6.3.1 免疫荧光染色 | 第89-90页 |
| 6.3.2 Real-time PCR检测基因水平的表达 | 第90页 |
| 6.3.3 Western blot实验 | 第90页 |
| 6.3.4 Transwell迁移实验 | 第90页 |
| 6.3.5 siRNA转染BMSCs | 第90页 |
| 6.4 实验结果 | 第90-94页 |
| 6.4.1 Cyto D和Jasp影响F-actin结构 | 第90-91页 |
| 6.4.2 改变F-actin结构影响细胞核形态 | 第91-92页 |
| 6.4.3 改变F-actin结构影响细胞核杨氏模量 | 第92-93页 |
| 6.4.4 siRNA敲减SUN1 | 第93-94页 |
| 6.4.5 敲减SUN1抑制BMSC迁移 | 第94页 |
| 6.5 分析讨论 | 第94-95页 |
| 6.5.1 细胞核作为胞内机械力学的传导者 | 第94-95页 |
| 6.5.2 细胞骨架调控细胞核的形态和硬度 | 第95页 |
| 6.5.3 LINC复合物与迁移 | 第95页 |
| 6.6 本章小结 | 第95-97页 |
| 7 OPN通过FAK-ERK1/2 信号通路影响BMSCs迁移 | 第97-109页 |
| 7.1 引言 | 第97页 |
| 7.2 实验材料 | 第97-99页 |
| 7.2.1 主要设备、耗材 | 第97-98页 |
| 7.2.2 主要药品与试剂 | 第98页 |
| 7.2.3 主要实验试剂的配制 | 第98-99页 |
| 7.3 实验方法 | 第99页 |
| 7.3.1 Transwell迁移实验 | 第99页 |
| 7.3.2 Western blot实验 | 第99页 |
| 7.3.3 细胞核提取 | 第99页 |
| 7.3.4 原子力显微镜测量细胞核杨氏模量 | 第99页 |
| 7.4 实验结果 | 第99-105页 |
| 7.4.1 OPN激活FAK-ERK1/2 信号通路 | 第99-100页 |
| 7.4.2 OPN通过FAK-ERK1/2 信号通路促进BMSCs迁移 | 第100-101页 |
| 7.4.3 OPN通过FAK-ERK1/2 信号通路影响BMSCs杨氏模量 | 第101-102页 |
| 7.4.4 OPN通过FAK-ERK1/2 信号通路降低BMSCs的lamin A/C表达 | 第102-103页 |
| 7.4.5 OPN通过ERK1/2 信号分子增加染色质凝集 | 第103-105页 |
| 7.5 分析讨论 | 第105-106页 |
| 7.5.1 FAK-ERK1/2 信号通路在OPN诱导的细胞迁移中的作用 | 第105-106页 |
| 7.5.2 ERK 1/2 信号分子调控染色质结构 | 第106页 |
| 7.6 本章小结 | 第106-109页 |
| 8 全文总结与展望 | 第109-111页 |
| 8.1 主要结论 | 第109页 |
| 8.2 后续工作展望 | 第109-111页 |
| 致谢 | 第111-113页 |
| 参考文献 | 第113-123页 |
| 附录 | 第123页 |
| 作者攻读博士学位期间的论文 | 第123页 |
