| 英文缩写说明 | 第9-10页 |
| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 第1章 绪论 | 第13-32页 |
| 1.1 前言 | 第13页 |
| 1.2 万古霉素研究概述 | 第13-20页 |
| 1.2.1 万古霉素的发展概况与面临的威胁 | 第13-15页 |
| 1.2.2 万古霉素的作用机制及细菌产生耐药性的机理 | 第15-17页 |
| 1.2.3 新糖肽类抗生素的开发及组合生物合成的应用 | 第17-20页 |
| 1.3 糖肽类抗生素生物合成基因簇研究概况及生物合成机理简介 | 第20-28页 |
| 1.3.1 糖肽类抗生素生物合成基因簇研究概况 | 第20-21页 |
| 1.3.2 糖肽类抗生素生物合成机理 | 第21-23页 |
| 1.3.3 糖肽类抗生素生物合成途径中后修饰反应 | 第23-28页 |
| 1.4 PCR-targeting重组系统简介 | 第28-30页 |
| 1.5 立题依据 | 第30-31页 |
| 1.6 拟采取的技术路线 | 第31-32页 |
| 第2章 vcm12 基因的敲除，克隆表达及体外活性研究 | 第32-65页 |
| 2.1 前言 | 第32页 |
| 2.2 实验材料 | 第32-39页 |
| 2.2.1 菌种与质粒 | 第32-33页 |
| 2.2.2 实验试剂 | 第33-35页 |
| 2.2.3 培养基 | 第35-36页 |
| 2.2.4 主要溶液 | 第36-38页 |
| 2.2.5 试验仪器 | 第38-39页 |
| 2.3 实验方法 | 第39-46页 |
| 2.3.1 东方拟无枝酸菌的培养 | 第39页 |
| 2.3.2 碱裂解法提取大肠杆菌质粒DNA | 第39-40页 |
| 2.3.3 大肠杆菌感受态细胞的制备（CaC12 法）及转化 | 第40页 |
| 2.3.4 DNA片段凝胶回收（V-gene DNA Gel Extraction Kit） | 第40-41页 |
| 2.3.5 PCR扩增安普霉素抗性基因盒 | 第41页 |
| 2.3.6 大肠杆菌电转感受态的制备及电转化 | 第41-42页 |
| 2.3.7 质粒从大肠杆菌向东方拟无枝酸菌的接合转移 | 第42页 |
| 2.3.8 东方拟无枝酸菌染色体的提取 | 第42-43页 |
| 2.3.9 东方拟无枝酸菌阻断突变株的验证 | 第43-44页 |
| 2.3.10 生物活性检测 | 第44页 |
| 2.3.11 大肠杆菌的培养和保藏 | 第44页 |
| 2.3.12 质粒DNA的酶切 | 第44页 |
| 2.3.13 质粒与外源片段的连接 | 第44-45页 |
| 2.3.14 大肠杆菌的诱导表达 | 第45页 |
| 2.3.15 菌体破碎 | 第45页 |
| 2.3.16 SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第45-46页 |
| 2.3.17 N-甲基转移酶的纯化 | 第46页 |
| 2.3.18 N-甲基转移酶的体外催化 | 第46页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第46-63页 |
| 2.4.1 利用PCR-targeting重组系统阻断基因vcm12 | 第46-48页 |
| 2.4.2 东方拟无枝酸菌vcm12 阻断突变株的验证 | 第48-51页 |
| 2.4.3 化合物LH02 的分离纯化 | 第51-52页 |
| 2.4.4 LH02 的结构确定 | 第52-54页 |
| 2.4.5 vcm12 基因表达载体pLYLH13 的构建 | 第54-57页 |
| 2.4.6 vcm12 编码的重组蛋白Vcm12 的诱导，表达及纯化 | 第57页 |
| 2.4.7 重组蛋白Vcm12 的体外酶活反应 | 第57页 |
| 2.4.8 化合物LH03 的分离纯化 | 第57-59页 |
| 2.4.9 化合物LH03 的结构确定 | 第59-61页 |
| 2.4.10 N-甲基转移酶对其它万古霉素类似物的酶催化反应 | 第61-63页 |
| 2.5 本章小结 | 第63-65页 |
| 第3章 vcm11 基因的敲除及克隆表达 | 第65-77页 |
| 3.1 前言 | 第65页 |
| 3.2 实验材料 | 第65-66页 |
| 3.2.1 菌种与质粒 | 第65页 |
| 3.2.2 实验试剂 | 第65页 |
| 3.2.3 培养基 | 第65页 |
| 3.2.4 主要溶液 | 第65-66页 |
| 3.2.5 实验仪器 | 第66页 |
| 3.3 实验方法 | 第66页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第66-75页 |
| 3.4.1 利用PCR-targeting重组系统阻断基因vcm11 | 第66-68页 |
| 3.4.2 东方拟无枝酸菌vcm11 阻断突变株的验证 | 第68-72页 |
| 3.4.3 vcm11 基因表达载体pLYLH16 的构建 | 第72-75页 |
| 3.4.4 vcm11 编码的重组蛋白Vcm11 的诱导表达及体外酶活反应 | 第75页 |
| 3.5 本章小结 | 第75-77页 |
| 第4章 万古霉素卤化反应相关的后修饰基因研究 | 第77-94页 |
| 4.1 前言 | 第77页 |
| 4.2 实验材料 | 第77-78页 |
| 4.2.1 菌种与质粒 | 第77页 |
| 4.2.2 实验试剂 | 第77-78页 |
| 4.2.3 培养基 | 第78页 |
| 4.2.4 主要溶液 | 第78页 |
| 4.2.5 实验仪器 | 第78页 |
| 4.3 实验方法 | 第78页 |
| 4.3.1 氨基酸添加实验 | 第78页 |
| 4.3.2 卤化酶的体外催化 | 第78页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第78-92页 |
| 4.4.1 利用PCR-targeting重组系统阻断基因vcm14 | 第78-80页 |
| 4.4.2 东方拟无枝酸菌vcm14 阻断突变株的验证 | 第80-81页 |
| 4.4.3 基因阻断突变株A. orientalis dvcm14 发酵结果分析 | 第81-82页 |
| 4.4.4 氨基酸添加实验研究vcm14 基因功能 | 第82页 |
| 4.4.5 利用PCR-targeting重组系统阻断基因vcm8 | 第82-84页 |
| 4.4.6 东方拟无枝酸菌vcm8 阻断突变株的验证 | 第84-87页 |
| 4.4.7 化合物LH13 的分离纯化 | 第87-88页 |
| 4.4.8 LH13 的结构确定 | 第88-89页 |
| 4.4.9 vcm8 基因表达载体pLYLH20 的构建 | 第89-92页 |
| 4.4.10 vcm8 编码的重组蛋白Vcm8 的诱导表达及体外酶活反应 | 第92页 |
| 4.5 本章小结 | 第92-94页 |
| 全文总结 | 第94-96页 |
| 对进一步研究工作的设想和建议 | 第96-97页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第97-98页 |
| 参考文献 | 第98-103页 |
| 致谢 | 第103-104页 |
| 附录 | 第104-129页 |
