| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 前言 | 第12-26页 |
| 1.1 与植物抗逆相关的蛋白质 | 第12-14页 |
| 1.1.1 水通道蛋白 | 第13页 |
| 1.1.2 LEA蛋白 | 第13页 |
| 1.1.3 转录因子 | 第13-14页 |
| 1.2 植物抗逆信号的转导及其表达调控 | 第14-15页 |
| 1.3 转录因子与植物抗逆应答途径 | 第15-18页 |
| 1.3.1 依赖于ABA的表达调节途径 | 第16-18页 |
| 1.3.2 不依赖于ABA的表达调节途径 | 第18页 |
| 1.4 植物中的DREB类转录因子 | 第18-22页 |
| 1.4.1 DRE元件 | 第18-19页 |
| 1.4.2 转录因子的结构特征 | 第19-20页 |
| 1.4.3 DREB类转录因子的表达及对胁迫反应的调节 | 第20-22页 |
| 1.5 DREB转录因子上游的调控因子 | 第22-24页 |
| 1.6 本论文的选题意义 | 第24-25页 |
| 1.7 技术路线 | 第25-26页 |
| 第二章 材料与方法 | 第26-38页 |
| 2.1 实验材料 | 第26页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第26页 |
| 2.1.2 主要试剂及试剂盒 | 第26页 |
| 2.1.3 载体和菌株 | 第26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-38页 |
| 2.2.1 BPDREB基因的获得及克隆 | 第26-32页 |
| 2.2.1.1 白菜秋绿60基因组DNA的提取 | 第26-27页 |
| 2.2.1.2 白菜秋绿60 BPDREB基因的PCR扩增 | 第27-28页 |
| 2.2.1.2.1 特异引物的设计 | 第27页 |
| 2.2.1.2.2 PCR扩增反应 | 第27-28页 |
| 2.2.1.3 目的基因BPDREB PCR产物纯化回收 | 第28-29页 |
| 2.2.1.4 目的片段的克隆 | 第29-32页 |
| 2.2.1.4.1 扩增片段3端加“A”尾 | 第29页 |
| 2.2.1.4.2 目的片段与克隆载体的连接反应 | 第29页 |
| 2.2.1.4.3 大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第29-30页 |
| 2.2.1.4.4 重组子的筛选及鉴定 | 第30-32页 |
| 2.2.1.4.4.1 PCR法利用通用引物筛选重组子 | 第30-31页 |
| 2.2.1.4.4.2 PCR法利用特异引物筛选重组子 | 第31页 |
| 2.2.1.4.4.3 大肠杆菌质粒DNA的小量制备及酶切鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.1.5 测序及序列分析 | 第32页 |
| 2.2.2 基因表达的验证 | 第32-33页 |
| 2.2.2.1 白菜中总RNA的提取及反转录 | 第32-33页 |
| 2.2.2.3 目的片段的扩增 | 第33页 |
| 2.2.2.4 目的片段的克隆及测序 | 第33页 |
| 2.2.3 BPDREB基因表达载体的构建 | 第33-37页 |
| 2.2.3.1 质粒的提取 | 第33页 |
| 2.2.3.2 植物表达载体PCAMBIA1031的酶切与大片段的回收、纯化 | 第33-34页 |
| 2.2.3.3 构建带有BglⅡ和BstEⅡ接头的BPDREB基因 | 第34-35页 |
| 2.2.3.4 接头目的片段的克隆、酶切鉴定及回收 | 第35页 |
| 2.2.3.5 粘连反应 | 第35页 |
| 2.2.3.6 将表达载体转化到大肠杆菌中进行扩增 | 第35页 |
| 2.2.3.7 重组质粒的提取，酶切鉴定及PCR检测 | 第35-36页 |
| 2.2.3.8 重组质粒转化农杆菌 | 第36-37页 |
| 2.2.4 拟南芥转基因植株的获得 | 第37-38页 |
| 2.2.4.1 拟南芥的培养 | 第37页 |
| 2.2.4.2 农杆菌浸染液的制备 | 第37页 |
| 2.2.4.3 拟南芥的花序浸泡法进行转化 | 第37页 |
| 2.2.4.4 拟南芥转基因植株的获得 | 第37-38页 |
| 第三章 结果与分析 | 第38-49页 |
| 3.1 白菜脱水应答转录因子基因BPDREB的扩增、克隆、测序及序列分析 | 第38-45页 |
| 3.1.1 白菜秋绿60基因组DNA的提取 | 第38页 |
| 3.1.2 白菜秋绿60转录因子基因BPDREB的PCR扩增 | 第38-39页 |
| 3.1.3 目的片段的纯化 | 第39页 |
| 3.1.4 目的片段阳性克隆的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.1.5 白菜秋绿60转录因子基因BPDREB的序列组成及分析 | 第40-44页 |
| 3.1.5.1 转录因子基因BPDREB测序结果 | 第40-41页 |
| 3.1.5.2 序列分析 | 第41-44页 |
| 3.2.2 基因表达的验证 | 第44-45页 |
| 3.2.2.1 白菜中总RNA的提取及反转录 | 第44页 |
| 3.2.2.2 目的片段的扩增 | 第44-45页 |
| 3.2.2.3 目的片段的克隆及测序 | 第45页 |
| 3.3 白菜中脱水应答转录因子基因BPDREB表达载体构建 | 第45-49页 |
| 3.3.1 提取PCAMBIA1031质粒 | 第45页 |
| 3.3.2 扩增带有BglⅡ和BstEⅡ酶切位点的序列 | 第45-46页 |
| 3.3.3 接头目的片段的克隆、酶切鉴定及回收 | 第46页 |
| 3.3.4 表达载体的连接正确性的鉴定 | 第46-47页 |
| 3.3.5 表达载体转入农杆菌后，进行PCR鉴定 | 第47页 |
| 3.3.6 浸染法转化拟南芥 | 第47-48页 |
| 3.3.7 转基因植株的获得 | 第48-49页 |
| 第四章 讨论 | 第49-53页 |
| 4.1 实验方法讨论 | 第49-50页 |
| 4.1.1 PCR体系的优化 | 第49页 |
| 4.1.2 克隆体系的优化 | 第49页 |
| 4.1.2.1 纯化产物浓度的确定 | 第49页 |
| 4.1.2.2 重组子筛选与鉴定的方法 | 第49页 |
| 4.1.3 表达载体构建体系的建立与优化 | 第49-50页 |
| 4.1.4 拟南芥的培养方法的改进 | 第50页 |
| 4.2 研究结果的讨论 | 第50-51页 |
| 4.3 本论文对植物抗逆研究的意义 | 第51页 |
| 4.4 研究拓展方案 | 第51-53页 |
| 4.4.1 利用RNA干涉研究基因功能 | 第51-52页 |
| 4.4.2 对目标植物进行转基因实验 | 第52-53页 |
| 第五章 结论 | 第53-54页 |
| 5.1 目的基因BpDREB的获得 | 第53页 |
| 5.2 cDNA对目的基因功能的初步验证 | 第53页 |
| 5.3 表达载体的构建 | 第53页 |
| 5.4 目的基因向拟南芥中的转化 | 第53-54页 |
| 参考文献 | 第54-60页 |
| 附录 | 第60-61页 |
| 致谢 | 第61页 |
