| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 中英文缩略语对照表 | 第7-11页 |
| 1 绪论 | 第11-18页 |
| 1.1 蛋氨酸限制 | 第11-13页 |
| 1.1.1 蛋氨酸限制与脂代谢 | 第11-12页 |
| 1.1.2 蛋氨酸限制与氧化应激 | 第12-13页 |
| 1.2 内源性H_2S | 第13-15页 |
| 1.2.1 H_2S与脂代谢 | 第14页 |
| 1.2.2 H_2S与氧化应激 | 第14-15页 |
| 1.3 内源性H_2S与蛋氨酸限制 | 第15页 |
| 1.4 MicroRNAs与内源性H_2S | 第15-16页 |
| 1.5 立题的意义和目的 | 第16-17页 |
| 1.6 待解决的问题和研究内容 | 第17-18页 |
| 2 材料与方法 | 第18-31页 |
| 2.1 试剂与仪器 | 第18-19页 |
| 2.1.1 实验动物 | 第18页 |
| 2.1.2 主要原料和试剂 | 第18页 |
| 2.1.3 主要试验设备 | 第18-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-21页 |
| 2.2.1 实验动物分组饲喂及样品采集 | 第19-20页 |
| 2.2.2 小鼠24h基础代谢情况监测 | 第20页 |
| 2.2.3 小鼠micro-CT扫描 | 第20-21页 |
| 2.3 指标测定 | 第21-25页 |
| 2.3.1 全血及肝脏组织ROS水平的测定 | 第21页 |
| 2.3.2 血脂和肝脏脂类含量的测定 | 第21页 |
| 2.3.3 肝脏HE和油红O染色 | 第21页 |
| 2.3.4 血浆和肝脏的氧化还原指标及肝脏蛋白含量的测定 | 第21页 |
| 2.3.5 H_2S含量的测定 | 第21-22页 |
| 2.3.6 肝脏总RNA的提取及反转录 | 第22页 |
| 2.3.7 实时荧光定量PCR | 第22-23页 |
| 2.3.8 MicroRNAs转录组高通量测序 | 第23页 |
| 2.3.9 MicroRNAs表达的qPCR验证 | 第23-24页 |
| 2.3.10 Western blot测定CBS和CSE蛋白水平 | 第24-25页 |
| 2.4 PsiCHECK2-CSE和psiCHECK2-mut-CSE双酶切载体的构建 | 第25-28页 |
| 2.4.1 CSE3’-UTR目的基因及CSE-mut 3’-UTR片段设计 | 第25页 |
| 2.4.2 CSE3’-UTR基因目的片段退火反应 | 第25-26页 |
| 2.4.3 PsiCHECK2-CSE和psiCHECK2-mut-CSE的质粒构建 | 第26-28页 |
| 2.5 双荧光素酶报告基因活性检测 | 第28-30页 |
| 2.5.1 PsiCHECK2载体工作原理 | 第28页 |
| 2.5.2 细胞培养 | 第28-29页 |
| 2.5.3 双荧光素酶报告基因活性检测 | 第29-30页 |
| 2.6 数据处理 | 第30-31页 |
| 3 结果与讨论 | 第31-55页 |
| 3.1 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠体重、采食量和活体代谢状态的影响 | 第31-34页 |
| 3.1.1 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠体重的影响 | 第31页 |
| 3.1.2 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠采食量的影响 | 第31-32页 |
| 3.1.3 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠RER的影响 | 第32-33页 |
| 3.1.4 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠活体能量消耗的影响 | 第33页 |
| 3.1.5 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠活动量的影响 | 第33-34页 |
| 3.1.6 小结 | 第34页 |
| 3.2 蛋氨酸限制对小鼠脂代谢的影响 | 第34-43页 |
| 3.2.1 蛋氨酸限制对小鼠体脂率和肝脂率的影响 | 第34-35页 |
| 3.2.2 蛋氨酸限制对小鼠血脂的影响 | 第35-36页 |
| 3.2.3 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠血浆和肝脏游离脂肪酸的影响 | 第36-37页 |
| 3.2.4 蛋氨酸限制对小鼠肝脏质量的影响 | 第37-38页 |
| 3.2.5 蛋氨酸限制对小鼠肝脏组织形态的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.6 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠肝脏TG和TC含量的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.7 蛋氨酸限制对小鼠肝脏脂肪合成相关基因的影响 | 第40-41页 |
| 3.2.8 蛋氨酸限制对小鼠肝脏脂肪分解相关基因的影响 | 第41-42页 |
| 3.2.9 小结 | 第42-43页 |
| 3.3 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠氧化还原状态的影响 | 第43-46页 |
| 3.3.1 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠血液和肝脏ROS的影响 | 第43-44页 |
| 3.3.2 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠血浆氧化还原状态的影响 | 第44-45页 |
| 3.3.3 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠肝脏氧化还原状态的影响 | 第45页 |
| 3.3.4 小结 | 第45-46页 |
| 3.4 蛋氨酸限制对小鼠肝脏内源性H_2S的影响 | 第46-50页 |
| 3.4.1 蛋氨酸限制对小鼠血浆和肝脏H_2S的影响 | 第46-47页 |
| 3.4.2 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠肝脏CBS和CSE酶活的影响 | 第47页 |
| 3.4.3 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠肝脏CBS和CSE mRNA表达的影响 | 第47-48页 |
| 3.4.4 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠肝脏CBS和CSE蛋白水平的影响 | 第48-49页 |
| 3.4.5 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠血浆Hcy含量的影响 | 第49-50页 |
| 3.4.6 小结 | 第50页 |
| 3.5 蛋氨酸限制对高脂饮食小鼠不同周期肝脏miRNAs表达的影响 | 第50-53页 |
| 3.5.1 各组小鼠肝脏miRNAs的表达差异 | 第50-51页 |
| 3.5.2 筛选所得miRNAs的qPCR验证 | 第51-52页 |
| 3.5.3 小结 | 第52-53页 |
| 3.6 双荧光素酶报告基因活性检测 | 第53-55页 |
| 3.6.1 生物信息学软件预测miR-328-3p与CSE3’-UTR结合区域 | 第53页 |
| 3.6.2 重组载体质粒测序结果 | 第53-54页 |
| 3.6.3 双荧光素酶报告基因活性检测 | 第54页 |
| 3.6.4 小结 | 第54-55页 |
| 主要结论和展望 | 第55-56页 |
| 主要结论 | 第55页 |
| 展望 | 第55-56页 |
| 致谢 | 第56-57页 |
| 参考文献 | 第57-64页 |
| 附录: 作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第64页 |
