| 摘要 | 第10-13页 |
| ABSTRACT | 第13-16页 |
| 缩略语表 | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第19-47页 |
| 1 前言 | 第19-20页 |
| 2 应激损伤肠道屏障的机制 | 第20-33页 |
| 2.1 肠道粘膜屏障 | 第20-22页 |
| 2.1.1 肠道粘液层 | 第20-21页 |
| 2.1.2 肠道上皮层 | 第21-22页 |
| 2.1.3 肠道固有层 | 第22页 |
| 2.2 肠道菌群 | 第22-24页 |
| 2.2.1 肠道菌群的构成 | 第23页 |
| 2.2.2 肠道菌群的分布 | 第23-24页 |
| 2.4 应激对肠道屏障的影响 | 第24-33页 |
| 2.4.1 应激和中枢神经系统 | 第25页 |
| 2.4.2 脑-肠-肠道菌群轴 | 第25-26页 |
| 2.4.3 应激激素和肠道粘膜屏障 | 第26-27页 |
| 2.4.4 应激对肠道菌群的影响 | 第27-29页 |
| 2.4.5 应激-肠道菌群-肠道屏障 | 第29-31页 |
| 2.4.6 应激-肠道菌群-肠道屏障-大脑 | 第31-33页 |
| 3 肠道氧化应激 | 第33-39页 |
| 3.1 肠道活性氧 | 第34-35页 |
| 3.1.1 活性氧的种类 | 第34-35页 |
| 3.1.2 肠道氧化损伤 | 第35页 |
| 3.2 肠道活性氧的来源 | 第35-39页 |
| 3.2.1 线粒体呼吸链途径 | 第36页 |
| 3.2.2 内源氧化酶途径 | 第36-38页 |
| 3.2.3 外源途径 | 第38-39页 |
| 4 活性氧在肠道中的清除 | 第39-41页 |
| 4.1 抗氧化酶系统 | 第39-40页 |
| 4.2 非酶抗氧化系统 | 第40页 |
| 4.3 外源抗氧化剂 | 第40-41页 |
| 5 止痢草油 | 第41-45页 |
| 5.1 止痢草油在肠道抗氧化中的作用 | 第42-43页 |
| 5.2 止痢草油在调节肠道菌群中的作用 | 第43-44页 |
| 5.3 止痢草油在调节肠道炎症中的作用 | 第44-45页 |
| 6 研究目的和意义 | 第45-47页 |
| 第二章 止痢草油对IPEC-J2细胞氧化损伤的保护作用及机制研究 | 第47-72页 |
| 1 前言 | 第47-48页 |
| 2 材料与方法 | 第48-56页 |
| 2.1 主要仪器 | 第48页 |
| 2.2 主要试剂 | 第48-50页 |
| 2.3 IPEC-J2细胞培养 | 第50页 |
| 2.4 测定项目与方法 | 第50-56页 |
| 2.4.1 MTT法检测细胞活性 | 第50-51页 |
| 2.4.2 细胞LDH释放检测 | 第51页 |
| 2.4.3 化学发光发检测培养基中活性氧水平 | 第51页 |
| 2.4.4 荧光探针检测细胞中活性氧水平 | 第51-52页 |
| 2.4.5 细胞MDA、GSH和SOD1水平检测 | 第52页 |
| 2.4.6 细胞总RNA抽提、纯化及反转录 | 第52-53页 |
| 2.4.7 细胞总蛋白和核蛋白的提取及Western blot检测 | 第53-54页 |
| 2.4.8 细胞免疫荧光 | 第54-55页 |
| 2.4.9 siRNA与细胞转染 | 第55页 |
| 2.4.10 DNA质粒的转染 | 第55-56页 |
| 2.4.11 Nrf2/ARE双荧光素酶活性的检测 | 第56页 |
| 2.5 数据处理和统计 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-69页 |
| 3.1 H2O2诱导IPEC-J2细胞氧化损伤浓度剂量和时间的确定 | 第56-57页 |
| 3.2 止痢草油对IPEC-J2细胞的作用浓度 | 第57-58页 |
| 3.3 止痢草油对H2O2诱导IPEC-J2细胞氧化损伤的影响 | 第58页 |
| 3.4 止痢草油对IPEC-J2细胞损伤模型中活性氧的影响 | 第58-59页 |
| 3.5 止痢草油对IPEC-J2细胞抗氧化酶mRNA表达量的影响 | 第59-61页 |
| 3.6 止痢草油对IPEC-J2细胞抗氧化酶蛋白表达和活性的影响 | 第61-62页 |
| 3.7 止痢草油对IPEC-J2细胞Nrf2 mRNA表达的影响 | 第62-63页 |
| 3.8 止痢草油对IPEC-J2细胞Nrf2/Keap1比值的影响 | 第63-64页 |
| 3.9 对Nrf2核转位的影响 | 第64页 |
| 3.10 止痢草油对ARE-Luc荧光素酶活性的影响 | 第64-65页 |
| 3.11 Nrf2 siRNA干扰 | 第65-66页 |
| 3.12 Nrf2 siRNA干扰对止痢草油诱导抗氧蛋白表达的影响 | 第66-69页 |
| 3.13 Nrf2 siRNA干扰降低止痢草油对IPEC-J2细胞氧化损伤的保护作用 | 第69页 |
| 4 讨论 | 第69-72页 |
| 第三章 小鼠腹腔巨噬RAW264.7 细胞活化对大鼠回肠上皮IEC-18 细胞氧化损伤的影响 | 第72-95页 |
| 1 前言 | 第72-73页 |
| 2 材料与方法 | 第73-78页 |
| 2.1 主要仪器 | 第73页 |
| 2.2 主要试剂 | 第73-74页 |
| 2.3 RAW264.7 细胞和IEC-18 细胞培养 | 第74页 |
| 2.4 细胞共培养模型的构建 | 第74-75页 |
| 2.5 测定项目与方法 | 第75-78页 |
| 2.5.1 单层肠上皮细胞跨膜电阻值TEER的测定 | 第75页 |
| 2.5.2 荧光黄单层肠上皮细胞透过率的测定 | 第75-76页 |
| 2.5.3 化学发光发检测培养基中活性氧水平 | 第76页 |
| 2.5.4 荧光探针检测细胞中活性氧水平 | 第76页 |
| 2.5.5 细胞MDA、GSH和GSSG水平检测 | 第76页 |
| 2.5.6 细胞总RNA抽提、纯化及反转录 | 第76-77页 |
| 2.5.7 细胞总蛋白和核蛋白的提取及Western blot检测 | 第77页 |
| 2.5.8 细胞免疫荧光 | 第77页 |
| 2.5.9 酶联免疫吸附法NADPH氧化酶检测试剂盒 | 第77-78页 |
| 2.5.10 siRNA与细胞转染 | 第78页 |
| 2.6 数据处理和统计 | 第78页 |
| 3 结果 | 第78-92页 |
| 3.1 RAW264.7 细胞对共培养中IEC-18 细胞跨上皮电阻的影响 | 第78-79页 |
| 3.2 RAW264.7 细胞对共培养中IEC-18 细胞荧光黄透过率的影响 | 第79-80页 |
| 3.3 RAW264.7 细胞对共培养中IEC-18 细胞氧化还原状态的影响 | 第80-82页 |
| 3.4 RAW264.7 细胞对共培养中IEC-18 细胞紧密连接蛋白ZO-1 和OccludinmRNA表达的影响 | 第82-83页 |
| 3.5 RAW264.7 细胞对共培养中IEC-18 细胞紧密连接蛋白ZO-1 和Occludin蛋白表达和分布的影响 | 第83-86页 |
| 3.6 RAW264.7 细胞对共培养中IEC-18 细胞凋亡的影响 | 第86-88页 |
| 3.7 RAW264.7 细胞对共培养中IEC-18 细胞NF-κB信号通路的影响 | 第88-89页 |
| 3.8 RAW264.7 细胞对共培养中IEC-18 细胞炎性因子mRNA表达的影响 | 第89-90页 |
| 3.9 转染NOX2 siRNA | 第90-91页 |
| 3.10 转染NOX2 siRNA对IEC-18 细胞氧化还原状态的影响 | 第91页 |
| 3.11 转染NOX2 siRNA对IEC-18 细胞通透性的影响 | 第91-92页 |
| 4 讨论 | 第92-95页 |
| 第四章 止痢草油对NADPH氧化酶介导的氧化应激和炎症反应的影响 | 第95-111页 |
| 1 前言 | 第95页 |
| 2 材料与方法 | 第95-99页 |
| 2.1 主要仪器 | 第95-96页 |
| 2.2 主要试剂 | 第96-97页 |
| 2.3 RAW264.7 细胞培养 | 第97页 |
| 2.4 测定项目与方法 | 第97-98页 |
| 2.4.1 MTT法检测细胞活性 | 第97页 |
| 2.4.2 细胞LDH释放率检测 | 第97页 |
| 2.4.3 化学发光发检测培养基中活性氧水平 | 第97页 |
| 2.4.4 荧光探针检测细胞中活性氧水平 | 第97页 |
| 2.4.5 酶联免疫吸附法检测试剂盒 | 第97页 |
| 2.4.6 细胞总RNA抽提、纯化及反转录 | 第97-98页 |
| 2.4.7 细胞总蛋白和核蛋白的提取及Western blot检测 | 第98页 |
| 2.4.8 细胞MDA、GSH和GSSG水平检测 | 第98页 |
| 2.4.9 siRNA与细胞转染 | 第98页 |
| 2.5 数据处理和统计 | 第98-99页 |
| 3 结果 | 第99-108页 |
| 3.1 止痢草油对RAW264.7 细胞毒性的影响 | 第99页 |
| 3.2 LPS对巨噬细胞毒性的影响 | 第99-100页 |
| 3.3 LPS对RAW264.7 细胞活性氧产生的影响 | 第100-101页 |
| 3.4 止痢草油对LPS诱导RAW264.7 细胞氧化还原状态的影响 | 第101-103页 |
| 3.5 止痢草油对LPS诱导RAW264.7 细胞炎症信号通路的研究 | 第103-105页 |
| 3.6 止痢草油对LPS诱导RAW264.7 细胞炎症反应的影响 | 第105-106页 |
| 3.7 NOX2 siRNA干扰对LPS诱导RAW264.7 细胞NADPH表达的影响 | 第106页 |
| 3.8 NOX2 siRNA干扰对LPS诱导RAW264.7 细胞活性氧和炎症因子mRNA表达的影响 | 第106-107页 |
| 3.9 止痢草油对LPS诱导RAW264.7 细胞NADPH表达的影响 | 第107-108页 |
| 4 结论 | 第108-111页 |
| 第五章 止痢草油缓解育肥猪运输应激和改善肠道的效果 | 第111-130页 |
| 1 前言 | 第111页 |
| 2 材料与方法 | 第111-119页 |
| 2.1 试验动物和分组 | 第111-113页 |
| 2.2 饲养管理和试验记录 | 第113页 |
| 2.3 运输应激 | 第113页 |
| 2.4 主要仪器 | 第113-114页 |
| 2.5 主要试剂 | 第114-115页 |
| 2.6 测定项目与方法 | 第115-119页 |
| 2.6.1 胴体性状 | 第115页 |
| 2.6.2 样品采集 | 第115-116页 |
| 2.6.3 肉品质的测定 | 第116页 |
| 2.6.4 氧化还原指标测定 | 第116页 |
| 2.6.5 血清内毒素的检测 | 第116-117页 |
| 2.6.6 组织形态学检测 | 第117页 |
| 2.6.7 空肠粘膜总RNA提取、纯化和反转录 | 第117-118页 |
| 2.6.8 肠道内容物中微生物定量分析细菌DNA的提取 | 第118-119页 |
| 2.6.9 肠道内容物中微生物定量定量分析 | 第119页 |
| 2.7 数据处理和统计 | 第119页 |
| 3 结果 | 第119-127页 |
| 3.1 止痢草油对运输应激育肥猪空肠形态的影响 | 第119-120页 |
| 3.2 止痢草油对运输应激育肥猪血清内毒素的影响 | 第120-121页 |
| 3.3 止痢草油对运输应激育肥猪空肠紧密连接ZO-1 和Occludin mRNA表达的影响 | 第121-122页 |
| 3.4 止痢草油对运输应激育肥猪空肠氧化还原状态的影响 | 第122页 |
| 3.5 止痢草油对运输应激育肥猪肠道菌群的影响 | 第122-123页 |
| 3.6 止痢草油对运输应激育肥猪运输失重和胴体性状的影响 | 第123-125页 |
| 3.7 止痢草油对运输应激育肥猪肉品质的影响 | 第125页 |
| 3.8 止痢草油对运输应激育肥猪体内氧化还原状态的影响 | 第125-127页 |
| 3.9 止痢草油对育肥猪生产性能的影响 | 第127页 |
| 4 讨论 | 第127-130页 |
| 第六章 总体讨论和结语 | 第130-134页 |
| 1 总体讨论 | 第130-132页 |
| 2 研究结论 | 第132-133页 |
| 3 创新点 | 第133页 |
| 4 本研究不足之处 | 第133-134页 |
| 参考文献 | 第134-163页 |
| 研究生期间已发表的主要论文和专利 | 第163-164页 |
| 致谢 | 第164-165页 |
