摘要 | 第7-9页 |
Abstract | 第9-10页 |
缩略语表(Abbreviation) | 第11-15页 |
第1章 文献综述 | 第15-29页 |
1.1 正粘病毒 | 第15-24页 |
1.1.1 A型流感病毒的概述 | 第15-19页 |
1.1.2 传染性鲑鱼贫血症病毒的概述 | 第19-24页 |
1.2 M1蛋白 | 第24-29页 |
第2章 材料与方法 | 第29-47页 |
2.1 材料 | 第29-33页 |
2.1.1 主要试剂 | 第29页 |
2.1.2 主要缓冲液以及凝胶的配制 | 第29-33页 |
2.1.3 主要仪器设备 | 第33页 |
2.2 方法 | 第33-47页 |
2.2.1 基因克隆以及质粒构建 | 第33-38页 |
2.2.1.2 目的基因的PCR扩增 | 第34-35页 |
2.2.1.3 PCR产物的电泳及回收 | 第35-36页 |
2.2.1.4 DNA片段和载体的酶切 | 第36页 |
2.2.1.5 DNA片段和载体的连接 | 第36页 |
2.2.1.6 连接产物的转化 | 第36-37页 |
2.2.1.7 重构的质粒提取和鉴定 | 第37-38页 |
2.2.1.8 本研究使用的载体和构建的重组质粒 | 第38页 |
2.2.2 蛋白的表达和纯化 | 第38-40页 |
2.2.2.1 蛋白的小量表达实验 | 第38-39页 |
2.2.2.2 标签蛋白的大量表达和纯化 | 第39-40页 |
2.2.2.3 蛋白质浓度的准确测定 | 第40页 |
2.2.3 晶体生长实验 | 第40-41页 |
2.2.3.1 结晶前蛋白的准备 | 第40页 |
2.2.3.2 结晶条件的初步筛选 | 第40-41页 |
2.2.3.3 结晶条件的优化 | 第41页 |
2.2.4 数据收集和结构解析 | 第41-43页 |
2.2.4.1 防冻剂的选择 | 第41-42页 |
2.2.4.2 数据收集 | 第42页 |
2.2.4.3 数据的处理 | 第42页 |
2.2.4.4 结构解析和修正 | 第42-43页 |
2.2.5 脂质体结合实验 | 第43-44页 |
2.2.6 荧光偏振分析 | 第44-45页 |
2.2.7 共迁移实验 | 第45页 |
2.2.8 ISAV的冷冻电子断层成像 | 第45-46页 |
2.2.9 Pull-down实验 | 第46页 |
2.2.10 转染实验 | 第46-47页 |
第3章 结果与分析 | 第47-85页 |
3.1 M1及其他相关蛋白的纯化 | 第47-48页 |
3.2 M1蛋白晶体生长条件的筛选和优化 | 第48-52页 |
3.3 M1蛋白数据收集与结构解析 | 第52-56页 |
3.4 M1蛋白晶体结构特征 | 第56-66页 |
3.4.1 ISAV-M1蛋白单体的结构特征 | 第56-60页 |
3.4.2 ISAV-M1与FLUA-M1的结构比较 | 第60-62页 |
3.4.3 ISAV-M1的空间聚合状态 | 第62-66页 |
3.5 ISAV-M1的膜结合功能 | 第66-70页 |
3.6 ISAV-M1的RNA结合功能 | 第70-74页 |
3.7 低温冷冻电镜断层扫描技术研究ISAV病毒颗粒 | 第74-76页 |
3.8 ISAV M1和NEP的亚细胞定位 | 第76-79页 |
3.9 ISAV M1和NEP的相互作用 | 第79页 |
3.10 Hsc70与ISAV M1或/和NEP的共定位 | 第79-81页 |
3.11 Hsc70与ISAV M1或/和NEP的相互作用 | 第81-85页 |
第4章 讨论 | 第85-89页 |
第5章 总结 | 第89-90页 |
参考文献 | 第90-101页 |
致谢 | 第101-102页 |
附录 | 第102-103页 |