| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第1章 绪论 | 第14-29页 |
| 1.1 荧光蛋白及其在生化分析中的应用 | 第14-26页 |
| 1.1.1 荧光蛋白的发展历程及发光机理 | 第14-18页 |
| 1.1.2 荧光蛋白在生物传感器中的应用 | 第18-26页 |
| 1.2 超电荷绿色荧光蛋白及其功能 | 第26-28页 |
| 1.2.1 超电绿色荷荧光蛋白 | 第26-27页 |
| 1.2.2 超电绿色荷荧光蛋白的性质和功能 | 第27-28页 |
| 1.3 本文构思 | 第28-29页 |
| 第2章 ScGFP 的载体构建和蛋白表达纯化 | 第29-40页 |
| 2.1 前言 | 第29页 |
| 2.2 材料 | 第29-31页 |
| 2.2.1 试剂 | 第29-30页 |
| 2.2.2 质粒和菌株 | 第30页 |
| 2.2.3 培养基的配制 | 第30页 |
| 2.2.4 溶液和缓冲液 | 第30-31页 |
| 2.2.5 实验仪器 | 第31页 |
| 2.3 实验方法 | 第31-34页 |
| 2.3.1 感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.3.2 重组质粒 pUC19-scgfp 的获得 | 第32页 |
| 2.3.3 重组质粒 pET28-scgfp 的构建 | 第32-33页 |
| 2.3.4 琼脂糖凝胶电泳和 SDS-PAGE | 第33页 |
| 2.3.5 ScGFP 的诱导表达和纯化 | 第33-34页 |
| 2.4 结果与讨论 | 第34-39页 |
| 2.4.1 “一锅法”构建重组质粒 pET28-scgfp | 第34-37页 |
| 2.4.2 ScGFP 的表达纯化和基本性质 | 第37-39页 |
| 2.5 小结 | 第39-40页 |
| 第3章 ScGFP 与 DNA 之间的相互作用的研究 | 第40-55页 |
| 3.1 前言 | 第40页 |
| 3.2 实验部分 | 第40-42页 |
| 3.2.1 实验试剂与仪器 | 第40-41页 |
| 3.2.2 表征 ScGFP/DNA 复合体 | 第41-42页 |
| 3.2.3 凝胶电泳研究 ScGFP-DNA 的相互作用 | 第42页 |
| 3.2.4 形成 ScGFP/DNA 复合体的光谱性质 | 第42页 |
| 3.2.5 猝灭基团标记的 DNA 荧光滴定 ScGFP | 第42页 |
| 3.3 结果与讨论 | 第42-54页 |
| 3.3.1 ScGFP/DNA 复合体 | 第42-44页 |
| 3.3.2 形成 ScGFP/DNA 复合体后对 ScGFP 光谱性质的影响 | 第44-47页 |
| 3.3.3 猝灭基团(BHQ1)标记的 DNA 荧光滴定 ScGFP | 第47-54页 |
| 3.4 小结 | 第54-55页 |
| 第4章 ScGFP/DNA 传感体系应用于 DNA 和 DNA 甲基化的检测 | 第55-71页 |
| 4.1 前言 | 第55-56页 |
| 4.2 实验部分 | 第56-59页 |
| 4.2.1 实验试剂与仪器 | 第56-57页 |
| 4.2.2 检测 TP53 基因序列和单碱基突变 | 第57页 |
| 4.2.3 质粒 DNA 甲基化与基因组 DNA 的提取 | 第57-58页 |
| 4.2.4 质粒 DNA 和基因组 DNA 的重亚硫酸盐处理 | 第58页 |
| 4.2.5 扩增目标 DNA 序列 | 第58-59页 |
| 4.2.6 检测特定 CpG 位点甲基化的过程 | 第59页 |
| 4.3 结果与讨论 | 第59-70页 |
| 4.3.1 基于 ScGFP 的 DNA 及单碱基突变的检测 | 第59-63页 |
| 4.3.2 基于 ScGFP 的特定 CpG 位点甲基化的检测 | 第63-70页 |
| 4.4 小结 | 第70-71页 |
| 第5章 ScGFP/DNA 传感体系应用于核酸酶和甲基化酶活性的分析 | 第71-83页 |
| 5.1 前言 | 第71-72页 |
| 5.2 实验部分 | 第72-73页 |
| 5.2.1 实验试剂与仪器 | 第72页 |
| 5.2.2 基于 ScGFP 传感平台的 S1 核酸酶活性的分析 | 第72-73页 |
| 5.2.3 基于 ScGFP 的限制性内切酶 EcoRI 活性的分析 | 第73页 |
| 5.2.4 基于 ScGFP 的 Dam 甲基化酶活性的分析 | 第73页 |
| 5.3 结果与讨论 | 第73-82页 |
| 5.3.1 基于 ScGFP/DNA 的 S1 核酸酶活性检测 | 第73-77页 |
| 5.3.2 基于 ScGFP/DNA 的限制性内切酶 EcoRI 的活性检测 | 第77-79页 |
| 5.3.3 基于 ScGFP/DNA 的 Dam 甲基化酶活性分析 | 第79-82页 |
| 5.4 小结 | 第82-83页 |
| 第6章 基于 H_(39)GFP 的免标记的金属离子和酶活性分析方法 | 第83-100页 |
| 6.1 前言 | 第83-84页 |
| 6.2 实验部分 | 第84-87页 |
| 6.2.1 实验试剂与仪器 | 第84-85页 |
| 6.2.2 H_(39)GFP 用于免标记检测水溶液中 Cu~(2+)实验过程 | 第85页 |
| 6.2.3 H_(39)GFP 与 Cu~(2+)之间结合常数的计算 | 第85-86页 |
| 6.2.4 H_(39)GFP 用于 AChE 活性及其抑制剂分析的实验过程 | 第86页 |
| 6.2.5 实际食物样品中西维因残留的分析 | 第86-87页 |
| 6.3 结果与讨论 | 第87-98页 |
| 6.3.1 H_(39)GFP 用于免标记检测水溶液中 Cu~(2+) | 第87-92页 |
| 6.3.2 H_(39)GFP 用于 AChE 和 AChE 抑制剂的检测 | 第92-98页 |
| 6.4 小结 | 第98-100页 |
| 结论 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-120页 |
| 附录 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第120-122页 |
| 致谢 | 第122页 |
