| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 缩略语表 | 第8-10页 |
| 目录 | 第10-13页 |
| 第1章 引言 | 第13-28页 |
| 1.1 溶菌酶研究进展 | 第13-14页 |
| 1.2 溶菌酶的分类与分布 | 第14-18页 |
| 1.2.1 c型溶菌酶(Chicken type lysozyme) | 第15-16页 |
| 1.2.2 g型溶菌酶(Goose type lysozyme) | 第16页 |
| 1.2.3 i型溶菌酶(Invertebrate lysozyme) | 第16页 |
| 1.2.4 噬菌体溶菌酶(Phage lysozyme) | 第16页 |
| 1.2.5 植物溶菌酶(Plant lysozyme) | 第16-17页 |
| 1.2.6 真菌与细菌溶菌酶(Fungus and bacterial lysozyme) | 第17-18页 |
| 1.3 溶菌酶的理化性质 | 第18页 |
| 1.4 溶菌酶的结构及作用机制 | 第18-22页 |
| 1.5 溶菌酶的主要功能 | 第22页 |
| 1.5.1 抗菌消炎作用 | 第22页 |
| 1.5.2 抗病毒作用 | 第22页 |
| 1.5.3 增强免疫力 | 第22页 |
| 1.6 溶菌酶的应用现状 | 第22-26页 |
| 1.6.1 溶菌酶在医学中的应用 | 第23页 |
| 1.6.2 溶菌酶在食品中的应用 | 第23-24页 |
| 1.6.3 溶菌酶在饲料工业中的应用 | 第24-25页 |
| 1.6.4 溶菌酶在包装工业中的应用 | 第25页 |
| 1.6.5 溶菌酶在生物工程中的应用 | 第25页 |
| 1.6.6 溶菌酶在应用中的局限性及解决方法 | 第25-26页 |
| 1.7 水生动物溶菌酶研究进展 | 第26-27页 |
| 1.8 本论文的研究目的和意义 | 第27-28页 |
| 第2章 褶纹冠蚌两种i-型溶菌酶基因(LYZ1和LYZ2)的克隆 | 第28-58页 |
| 1. 前言 | 第28页 |
| 2. 材料与方法 | 第28-37页 |
| 2.1 实验材料 | 第28页 |
| 2.2 菌株和质粒 | 第28-29页 |
| 2.3 主要试剂 | 第29页 |
| 2.4 主要仪器设备 | 第29页 |
| 2.5 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.5.1 褶纹冠蚌总RNA的提取 | 第29-30页 |
| 2.5.2 褶纹冠蚌SMART cDNA的合成 | 第30-32页 |
| 2.5.3 CpLYZ2基因3’末端的克隆 | 第32-33页 |
| 2.5.4 CpLYZ1和CpLYZ2基因5’末端的克隆 | 第33-34页 |
| 2.5.5 两种CpLYZ基因的生物信息学分析 | 第34-36页 |
| 2.5.6 Real-Time PCR分析CpLYZ1和CpLYZ2基因的表达特征 | 第36-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-55页 |
| 3.1 褶纹冠蚌中总RNA的提取 | 第37-38页 |
| 3.2 CpLYZ1和CpLYZ2基因的cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第38-43页 |
| 3.2.1 CpLYZ1基因的cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第38-40页 |
| 3.2.2 CpLYZ2基因的cDNA序列及推导的氨基酸序列 | 第40-42页 |
| 3.2.3 两种褶纹冠蚌LYZ基因的氨基酸序列的比较 | 第42-43页 |
| 3.3 推导的CpLYZ氨基酸序列的同源性比较 | 第43-46页 |
| 3.4 LYZ基因的系统进化树 | 第46-48页 |
| 3.4.1 不同类型溶菌酶基因的系统进化树 | 第46页 |
| 3.4.2 i-型溶菌酶基因的系统进化树 | 第46-48页 |
| 3.5 CpLYZ基因的定量表达 | 第48-55页 |
| 3.5.1 CpLYZ1和CpLYZ2基因的组织表达 | 第50-51页 |
| 3.5.2 嗜水气单胞菌和PBS刺激后CpLYZ1和CpLYZ2基因在褶纹冠蚌血细胞、肝胰腺、鳃组织中的表达变化 | 第51-55页 |
| 4 讨论 | 第55-58页 |
| 第3章 褶纹冠蚌i-型溶菌酶(LYZ1和LYZ2)基因的原核表达及产物活性 | 第58-83页 |
| 1. 前言 | 第58-59页 |
| 2. 材料与方法 | 第59-70页 |
| 2.1 菌株和质粒 | 第59页 |
| 2.2 试剂和主要仪器 | 第59-60页 |
| 2.3 实验方法 | 第60-70页 |
| 2.3.1 CpLYZ1和CpLYZ2基因的原核表达 | 第60-66页 |
| 2.3.2 重组CpLYZ1和CpLYZ2酶活性的测定 | 第66-68页 |
| 2.3.3 CpLYZ2多克隆抗体的制备 | 第68页 |
| 2.3.4 多克隆抗体效价的测定 | 第68-69页 |
| 2.3.5 Western-blotting验证CpLYZ2 | 第69-70页 |
| 3. 结果 | 第70-80页 |
| 3.1 CpLYZ1和CpLYZ2基因的原核表达及纯化 | 第70-74页 |
| 3.2 两种重组CpLYZ蛋白浓度的测定 | 第74页 |
| 3.3 pH、温度对重组CpLYZ1和CpLYZ2相对酶活力的影响 | 第74-76页 |
| 3.4 重组CpLYZ1和CpLYZ2的抗菌谱 | 第76-78页 |
| 3.4.1 37℃时重组CpLYZ1和CpLYZ2的抗菌谱 | 第76-77页 |
| 3.4.2 50℃时重组CpLYZ1和CpLYZ2的抗菌谱 | 第77-78页 |
| 3.5 两种重组CpLYZ活性的比较 | 第78页 |
| 3.6 两种重组CpLYZ的非酶抗菌活力 | 第78-79页 |
| 3.7 CpLYZ2多克隆抗体效价的测定 | 第79页 |
| 3.8 Western-blotting验证 | 第79-80页 |
| 4 讨论 | 第80-83页 |
| 第4章 结论与展望 | 第83-86页 |
| 4.1 结论 | 第83-85页 |
| 4.2 展望 | 第85-86页 |
| 致谢 | 第86-87页 |
| 参考文献 | 第87-95页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第95页 |
