| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 缩略词表 | 第8-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-24页 |
| 1.1 粮食中真菌毒素的污染概况 | 第13页 |
| 1.2 玉米赤霉烯酮的性质及危害 | 第13-14页 |
| 1.3 ZEN清除方法 | 第14-17页 |
| 1.3.1 物理方法 | 第14-15页 |
| 1.3.2 化学方法 | 第15页 |
| 1.3.3 生物方法 | 第15-17页 |
| 1.4 ZEN检测方法 | 第17-18页 |
| 1.5 枯草芽孢杆菌及其表达系统 | 第18-19页 |
| 1.6 应用于枯草芽孢杆菌系统的启动子 | 第19-22页 |
| 1.6.1 枯草芽孢杆菌中的σ因子 | 第19页 |
| 1.6.2 启动子的结构 | 第19-20页 |
| 1.6.3 启动子的结构对表达效率的影响 | 第20页 |
| 1.6.4 枯草芽孢杆菌系统的启动子 | 第20-22页 |
| 1.7 研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二章 P_(lapS)启动子介导的ZEN降解酶基因的高效表达 | 第24-36页 |
| 2.1 实验材料 | 第24-26页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第24页 |
| 2.1.2 培养基及抗生素 | 第24-25页 |
| 2.1.3 分子生物学试剂及其配制 | 第25页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第25-26页 |
| 2.2 研究方法 | 第26-30页 |
| 2.2.1 启动子及信号肽片段的克隆 | 第26-27页 |
| 2.2.2 PCR产物的纯化 | 第27页 |
| 2.2.3 质粒pWBZ1的提取 | 第27页 |
| 2.2.4 质粒pWBZ1及目的片段的酶切 | 第27-28页 |
| 2.2.5 DNA片段的连接 | 第28页 |
| 2.2.6 枯草芽孢杆菌（Bs 168）感受态细胞的制备 | 第28页 |
| 2.2.7 连接产物的转化 | 第28页 |
| 2.2.8 转化子的PCR、酶切鉴定 | 第28-29页 |
| 2.2.9 ZEN标准曲线的制作及标准品的处理 | 第29-30页 |
| 2.2.10 转化子的ZEN降解酶活性测定 | 第30页 |
| 2.2.11 ZEN降解产物的质谱解析 | 第30页 |
| 2.3 结果分析 | 第30-35页 |
| 2.3.1 P_(lapS)和信号肽片段的克隆 | 第30-31页 |
| 2.3.2 表达载体pWBZ7及转化子Z7的构建 | 第31-32页 |
| 2.3.3 转化子PCR及酶切鉴定 | 第32-33页 |
| 2.3.4 ZEN标准曲线的制作 | 第33页 |
| 2.3.5 转化子Z7的ZEN降解酶活性验证 | 第33-34页 |
| 2.3.6 ZEN降解产物的质谱分析 | 第34-35页 |
| 2.4 讨论与小结 | 第35-36页 |
| 第三章 Western Blot检测ZEN降解酶的表达研究 | 第36-43页 |
| 3.1 实验材料 | 第36-39页 |
| 3.1.1 菌株、培养基及抗生素 | 第36页 |
| 3.1.2 生化试剂及配制 | 第36-38页 |
| 3.1.3 仪器设备 | 第38-39页 |
| 3.2 研究方法 | 第39-41页 |
| 3.2.1 Western Blot抗体的制备 | 第39-40页 |
| 3.2.2 Z7工程菌中ZEN降解酶的Western Blot分析 | 第40-41页 |
| 3.3 结果分析 | 第41-42页 |
| 3.3.1 蛋白纯化后的SDS-PAGE分析及浓度测定 | 第41页 |
| 3.3.2 Western Blot分析 | 第41-42页 |
| 3.4 本章小结 | 第42-43页 |
| 第四章 P43与PlapS介导的ZEN降解酶基因表达的评价和比较 | 第43-50页 |
| 4.1 实验材料 | 第43页 |
| 4.1.1 培养基及抗生素 | 第43页 |
| 4.1.2 生化试剂及配制 | 第43页 |
| 4.1.3 仪器设备 | 第43页 |
| 4.2 研究方法 | 第43-44页 |
| 4.2.1 ZEN降解酶在工程菌Z1、Z7中的分泌表达 | 第43页 |
| 4.2.2 ZEN降解酶活性测定 | 第43-44页 |
| 4.2.3 发酵上清液的SDS-PAGE检测 | 第44页 |
| 4.2.4 在Z1、Z7工程菌中表达的降解酶的Western Blot分析 | 第44页 |
| 4.2.5 重组质粒的稳定性分析 | 第44页 |
| 4.2.6 启动子的结构分析 | 第44页 |
| 4.3 结果分析 | 第44-48页 |
| 4.3.1 ZEN工程菌的摇瓶发酵、降解酶的活性测定和比较 | 第44-45页 |
| 4.3.2 ZEN降解酶SDS-PAGE分析 | 第45-46页 |
| 4.3.3 Western Blot分析 | 第46页 |
| 4.3.4 重组质粒的稳定性分析 | 第46-47页 |
| 4.3.5 两种启动子的结构差异分析 | 第47-48页 |
| 4.4 讨论与小结 | 第48-50页 |
| 第五章 ZEN降解菌的应用研究 | 第50-55页 |
| 5.1 实验材料 | 第50页 |
| 5.1.1 菌株及实验样品 | 第50页 |
| 5.1.2 培养基及抗生素 | 第50页 |
| 5.1.3 试剂及设备 | 第50页 |
| 5.2 研究方法 | 第50-51页 |
| 5.2.1 发酵上清液对玉米醪中ZEN的降解效果评价 | 第50-51页 |
| 5.2.2 发酵上清液对酒糟蛋白（DDGS）中ZEN的降解效果评价 | 第51页 |
| 5.2.3 工程菌的放大发酵试验 | 第51页 |
| 5.3 结果分析 | 第51-54页 |
| 5.3.1 发酵上清液对玉米醪中ZEN的降解效果 | 第51-52页 |
| 5.3.2 发酵上清液对酒糟蛋白（DDGS）中ZEN的降解效果 | 第52页 |
| 5.3.3 工程菌Z7的放大发酵试验 | 第52-54页 |
| 5.4 本章小结 | 第54-55页 |
| 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-61页 |
| 致谢 | 第61-62页 |
| 作者简历 | 第62页 |
