| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-25页 |
| ·核酸酶 P1 的研究进展 | 第11-18页 |
| ·核酸酶 | 第11-16页 |
| ·核酸酶 P1 的发展历程及应用 | 第16-18页 |
| ·毕赤酵母表达系统 | 第18-22页 |
| ·启动子 | 第19-20页 |
| ·标签 | 第20-21页 |
| ·分泌型蛋白的翻译后修饰 | 第21-22页 |
| ·分泌信号 | 第21页 |
| ·二硫键形成 | 第21页 |
| ·O-或 N-链接的糖基化 | 第21-22页 |
| ·重叠延伸 PCR 技术的发展及应用 | 第22-23页 |
| ·立题依据和研究目的 | 第23-25页 |
| 第二章 核酸酶 P1 的原核表达、纯化及活性分析 | 第25-43页 |
| ·材料 | 第25-30页 |
| ·质粒载体 | 第25页 |
| ·宿主菌 | 第25页 |
| ·实验材料及试剂盒 | 第25页 |
| ·实验试剂 | 第25-28页 |
| ·培养基 | 第28-29页 |
| ·主要仪器 | 第29页 |
| ·引物 | 第29-30页 |
| ·实验方法 | 第30-34页 |
| ·NP1 基因的拼接 | 第30页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第30-33页 |
| ·感受态细胞制备 | 第33页 |
| ·重组 NP1 酶活力检测及表达条件优化 | 第33页 |
| ·重组 NP1 的纯化与酶活性电泳检测 | 第33-34页 |
| ·重组 NP1 的热稳定性 | 第34页 |
| ·重组 NP1 的金属离子依赖性 | 第34页 |
| ·结果分析 | 第34-41页 |
| ·NP1 基因的人工合成 | 第34页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·重组 NP1 的表达及表达条件优化 | 第36-37页 |
| ·重组 NP1 的纯化与酶活性电泳检测 | 第37-40页 |
| ·重组 NP1 的热稳定性 | 第40-41页 |
| ·重组 NP1 的金属离子依赖性 | 第41页 |
| ·讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 核酸酶 P1 在毕赤酵母中的表达及活性分析 | 第43-58页 |
| ·材料 | 第43-47页 |
| ·质粒载体 | 第43页 |
| ·宿主菌 | 第43页 |
| ·实验材料及试剂盒 | 第43页 |
| ·实验试剂 | 第43-45页 |
| ·毕赤酵母培养基配方 | 第45-46页 |
| ·主要仪器 | 第46页 |
| ·引物 | 第46-47页 |
| ·实验方法 | 第47-50页 |
| ·重组载体的构建 | 第47-48页 |
| ·重组载体电转化及阳性重组子的筛选 | 第48-49页 |
| ·重组载体的线性化 | 第48页 |
| ·毕赤酵母感受态细胞的制备及转化 | 第48-49页 |
| ·阳性重组子的筛选 | 第49页 |
| ·阳性重组子的鉴定 | 第49页 |
| ·基因组 DNA 的提取 | 第49页 |
| ·基因组 DNA PCR 鉴定 | 第49页 |
| ·重组蛋白表达条件的优化及酶活性测定 | 第49-50页 |
| ·重组蛋白的初步纯化 | 第50页 |
| ·酶活性凝胶电泳检测 | 第50页 |
| ·结果与分析 | 第50-56页 |
| ·重组表达载体 pPIC9K-NP1-His 和 pPIC9K-MF-pre-NP1 构建 | 第50-51页 |
| ·重组载体电转化及毕赤酵母阳性重组子的筛选 | 第51-53页 |
| ·菌株的筛选和表达条件的优化 | 第53-55页 |
| ·重组 NP1 的初步纯化 | 第55-56页 |
| ·酶活性凝胶电泳检测 | 第56页 |
| ·讨论 | 第56-58页 |
| 第四章 结论与创新点 | 第58-59页 |
| ·结论 | 第58页 |
| ·创新点 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 缩略词 | 第67-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 作者简介 | 第70页 |