梭菌氢酶基因hyd的同源克隆、原核表达以及敲除载体的构建
| 摘要 | 第1-6页 |
| ABSTRACT | 第6-11页 |
| 第一章 绪论 | 第11-19页 |
| ·氢酶的研究现状 | 第11-13页 |
| ·氢酶的分类 | 第11页 |
| ·氢酶的结构 | 第11-12页 |
| ·氢酶基因的克隆与表达 | 第12-13页 |
| ·产氢菌 | 第13-14页 |
| ·产氢菌的分类 | 第13页 |
| ·生物制氢的研究 | 第13-14页 |
| ·梭菌氢酶的研究 | 第14-16页 |
| ·铁还原菌研究进展 | 第16-17页 |
| ·铁还原菌概述 | 第16页 |
| ·异化铁还原的意义 | 第16页 |
| ·异化铁还原机制研究进展 | 第16-17页 |
| ·基因失活的研究方法 | 第17-18页 |
| ·选题依据 | 第18-19页 |
| ·背景简介 | 第18页 |
| ·研究内容 | 第18-19页 |
| 第二章 菌株鉴定 | 第19-25页 |
| ·实验材料 | 第19页 |
| ·菌株与质粒 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·实验方法 | 第19-22页 |
| ·基因组 DNA 提取 | 第19-20页 |
| ·16S rDNA 的扩增 | 第20页 |
| ·回收纯化 | 第20页 |
| ·连接与转化 | 第20-21页 |
| ·检测与测序 | 第21-22页 |
| ·构建系统发育树 | 第22页 |
| ·结果与分析 | 第22-24页 |
| ·总 DNA 的提取 | 第22页 |
| ·16S rDNA 的 PCR 扩增 | 第22页 |
| ·菌落 PCR 检测 | 第22-23页 |
| ·测序结果 | 第23-24页 |
| ·小结 | 第24-25页 |
| 第三章 氢酶基因的同源克隆及序列分析 | 第25-30页 |
| ·实验材料 | 第25页 |
| ·菌株与质粒 | 第25页 |
| ·主要试剂 | 第25页 |
| ·实验方法 | 第25-26页 |
| ·引物设计 | 第25页 |
| ·氢酶基因（hyd）部分序列的同源克隆 | 第25-26页 |
| ·序列分析 | 第26页 |
| ·结果与分析 | 第26-28页 |
| ·hyd 基因部分序列扩增结果 | 第26页 |
| ·hyd 基因片段序列分析 | 第26-27页 |
| ·hyd 基因片段的系统发育分析 | 第27-28页 |
| ·hyd 基因片段的分子结构预测 | 第28页 |
| ·讨论 | 第28-29页 |
| ·小结 | 第29-30页 |
| 第四章 氢酶基因的原核表达 | 第30-40页 |
| ·实验材料 | 第30页 |
| ·菌株与质粒 | 第30页 |
| ·工具酶与试剂 | 第30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30页 |
| ·实验方法 | 第30-34页 |
| ·原核表达载体的构建 | 第30-32页 |
| ·目的基因在大肠杆菌中的表达 | 第32-34页 |
| ·目的蛋白诱导表达条件的优化 | 第34页 |
| ·可溶性表达分析 | 第34页 |
| ·结果与分析 | 第34-38页 |
| ·氢酶基因部分片段的扩增 | 第34-35页 |
| ·重组表达质粒双酶切鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组表达片段的分子量预测图 | 第36页 |
| ·目的蛋白表达检测 | 第36-37页 |
| ·诱导条件优化 | 第37-38页 |
| ·可溶性分析检测 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-39页 |
| ·小结 | 第39-40页 |
| 第五章 氢酶基因敲除载体的构建 | 第40-45页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·菌株与质粒 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·实验方法 | 第40-42页 |
| ·5'端同源臂及抗性基因的扩增 | 第40-41页 |
| ·敲除载体的构建 | 第41-42页 |
| ·结果与分析 | 第42-43页 |
| ·同源臂与抗性基因片段的扩增结果 | 第42页 |
| ·敲除载体构建结果 | 第42-43页 |
| ·讨论 | 第43页 |
| ·小结 | 第43-45页 |
| 第六章 氢酶基因的相对定量检测 | 第45-54页 |
| ·实验材料 | 第45页 |
| ·菌液样品 | 第45页 |
| ·所用试剂 | 第45页 |
| ·所用仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·菌液样品培养 | 第45-46页 |
| ·提取 RNA | 第46-47页 |
| ·cDNA 的合成 | 第47页 |
| ·PCR | 第47页 |
| ·相对定量 PCR | 第47页 |
| ·结果表示 | 第47-48页 |
| ·结果与分析 | 第48-51页 |
| ·RNA 的提取 | 第48页 |
| ·cDNA 的常规 PCR 检验 | 第48页 |
| ·相对定量 PCR 结果 | 第48-49页 |
| ·相对定量 PCR 数据分析 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·小结 | 第53-54页 |
| 第七章 结论与展望 | 第54-55页 |
| ·结论 | 第54页 |
| ·展望 | 第54-55页 |
| 参考文献 | 第55-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60页 |
