| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 第一章 绪论 | 第10-23页 |
| 1.1 引言 | 第10页 |
| 1.2 抗菌肽的分类 | 第10-13页 |
| 1.2.1 根据生物活性分类 | 第11-12页 |
| 1.2.2 根据结构分类 | 第12-13页 |
| 1.3 抗菌肽作用机理 | 第13-15页 |
| 1.3.1 细胞膜作用机制 | 第13-15页 |
| 1.3.2 胞内作用机制 | 第15页 |
| 1.4 抗菌肽耐药机理 | 第15-17页 |
| 1.4.1 固有耐受机制 | 第15-16页 |
| 1.4.2 可诱导耐受机制 | 第16-17页 |
| 1.5 抗菌肽制备 | 第17-18页 |
| 1.5.1 化学合成 | 第17页 |
| 1.5.2 生物合成 | 第17-18页 |
| 1.6 抗菌肽的应用 | 第18-20页 |
| 1.6.1 抗菌肽临床研究 | 第18-19页 |
| 1.6.2 抗菌肽在水产养殖中的应用 | 第19-20页 |
| 1.6.3 抗菌肽在畜牧业中的应用 | 第20页 |
| 1.7 论文研究内容及意义 | 第20-23页 |
| 1.7.1 研究背景及意义 | 第20-21页 |
| 1.7.2 研究内容 | 第21-22页 |
| 1.7.3 技术路线 | 第22-23页 |
| 第二章 抗菌肽ALFpm3在大肠杆菌中的克隆表达及其生物活性检测 | 第23-48页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-27页 |
| 2.2.1 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.2.2 主要试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.3 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.4 常用溶液及培养基配制 | 第25-27页 |
| 2.3 实验方法 | 第27-34页 |
| 2.3.1 pET22b-ALFpm3的构建 | 第27-30页 |
| 2.3.2 pET22b-ALFpm3-PT18A的构建 | 第30-33页 |
| 2.3.3 E. coli感受态细胞的制备 | 第33页 |
| 2.3.4 pET22b-ALFpm3转化E. coli DH5α | 第33-34页 |
| 2.3.5 重组质粒pET22b-ALFpm3鉴定 | 第34页 |
| 2.4 pET22b-ALFpm3转化E.coli origamiB(DE3) | 第34页 |
| 2.5 E.coli origamiB(DE3)/ pET22b-ALFpm3小量表达 | 第34-38页 |
| 2.5.1. 小量表达 | 第34-35页 |
| 2.5.2 Tricine-SDS-PAGE电泳分析 | 第35-36页 |
| 2.5.3 抑菌活性检测 | 第36-37页 |
| 2.5.4 镍柱亲和层析纯化ALFpm3 | 第37-38页 |
| 2.5.5 重组蛋白热稳定性测试 | 第38页 |
| 2.6 实验结果与讨论 | 第38-47页 |
| 2.6.1 pET22b-ALFpm3质粒构建 | 第38-39页 |
| 2.6.2 pET22b-ALFpm3-PT18A质粒构建 | 第39-40页 |
| 2.6.3 E.coli origamiB(DE3)/pET22b-ALFpm3生长曲线 | 第40-41页 |
| 2.6.4 E. coli origamiB(DE3)/pET22b-ALFpm3-PT 18A生长曲线 | 第41-42页 |
| 2.6.5 E. coli origamiB(DE3)/pET22b-ALFpm3诱导表达分析 | 第42页 |
| 2.6.6 E. coli origamiB(DE3)/pET22b-ALFpm3-PT 18A诱导表达分析 | 第42-43页 |
| 2.6.7 重组蛋白抑菌活性测试 | 第43-45页 |
| 2.6.8 重组ALFpm3热稳定性测试 | 第45-47页 |
| 2.7 本章小结 | 第47-48页 |
| 第三章 抗菌肽在毕赤酵母中的克隆表达及生物活性检测 | 第48-66页 |
| 3.1 引言 | 第48页 |
| 3.2 实验材料 | 第48-52页 |
| 3.2.1 菌株与质粒 | 第48页 |
| 3.2.2 主要试剂 | 第48-50页 |
| 3.2.3 实验仪器 | 第50页 |
| 3.2.4 常用试剂配制 | 第50-52页 |
| 3.3 实验方法 | 第52-60页 |
| 3.3.1 重组质粒构建 | 第52-55页 |
| 3.3.2 重组质粒筛选 | 第55-56页 |
| 3.3.3 P. pastoris感受态细胞的制备 | 第56页 |
| 3.3.4 P. pastoris电转化 | 第56-58页 |
| 3.3.5 重组菌株摇瓶发酵 | 第58页 |
| 3.3.6 Western Blot检测 | 第58-60页 |
| 3.3.7 重组菌株上罐发酵 | 第60页 |
| 3.4 实验结果 | 第60-65页 |
| 3.4.1 pPIC9K-ALFpm3-6 His tag质粒构建 | 第60-62页 |
| 3.4.2 pPIC9K- OH-CATH-6 His tag质粒构建 | 第62-63页 |
| 3.4.3 P. pastoris KM71摇瓶发酵 | 第63-64页 |
| 3.4.4 P. pastoris KM71/pPIC9K-ALFpm3-6 His tag上罐发酵 | 第64页 |
| 3.4.5 P. pastoris KM71/pPIC9K-ALFpm3-6 His tag上罐发酵上清活性检测 | 第64-65页 |
| 3.5 本章小结 | 第65-66页 |
| 结论与展望 | 第66-68页 |
| 结论 | 第66页 |
| 展望 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 攻读硕士学位期间取得的研究成果 | 第75-76页 |
| 致谢 | 第76-77页 |
| 附件 | 第77页 |
