| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-23页 |
| 1.1 舞毒蛾 | 第11-12页 |
| 1.1.1 舞毒蛾的危害 | 第11-12页 |
| 1.1.2 舞毒蛾的防治 | 第12页 |
| 1.2. 几丁质 | 第12-15页 |
| 1.2.1 几丁质简介 | 第12-13页 |
| 1.2.2 昆虫几丁质 | 第13-14页 |
| 1.2.3 几丁质及衍生物的应用 | 第14-15页 |
| 1.3 昆虫几丁质酶 | 第15-18页 |
| 1.3.1 18家族几丁质酶 | 第15-16页 |
| 1.3.2 昆虫几丁质酶的分类 | 第16-17页 |
| 1.3.3 昆虫几丁质酶的功能与应用 | 第17-18页 |
| 1.4 催化区的保守基序 | 第18-19页 |
| 1.5 几丁质酶活测定方法 | 第19-20页 |
| 1.6 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统 | 第20页 |
| 1.7 本论文的选题依据及研究内容 | 第20-23页 |
| 1.7.1 研究课题主要来源 | 第20-21页 |
| 1.7.2 选题依据 | 第21页 |
| 1.7.3 研究内容与技术流程 | 第21-23页 |
| 第二章 定点突变与重组载体构建 | 第23-37页 |
| 2.1 引言 | 第23页 |
| 2.2 实验材料 | 第23-26页 |
| 2.2.1 实验试剂 | 第23-24页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第24-25页 |
| 2.2.3 实验所用溶液配制 | 第25-26页 |
| 2.3 实验方法 | 第26-32页 |
| 2.3.1 舞毒蛾Ⅰ型几丁质酶（LdCht5）基因的定点突变 | 第26-29页 |
| 2.3.2 重组表达载体的构建 | 第29-32页 |
| 2.4 实验结果与分析 | 第32-36页 |
| 2.4.1 Blunt-Ldcht5质粒电泳鉴定 | 第32页 |
| 2.4.2 突变几丁质酶基因获取 | 第32-33页 |
| 2.4.3 胶回收 | 第33-34页 |
| 2.4.4 酶切纯化 | 第34页 |
| 2.4.5 重组体的鉴定 | 第34-36页 |
| 2.5 本章小结 | 第36-37页 |
| 第三章 Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的构建及目的蛋白的纯化 | 第37-51页 |
| 3.1 引言 | 第37页 |
| 3.2 实验材料 | 第37-40页 |
| 3.2.1 实验试剂 | 第37-38页 |
| 3.2.2 实验仪器 | 第38页 |
| 3.2.3 实验所用溶液配制 | 第38-40页 |
| 3.3 实验方法 | 第40-46页 |
| 3.3.1 表达载体的重组构建 | 第40-41页 |
| 3.3.2 Sf9细胞的培养 | 第41-42页 |
| 3.3.3 病毒扩增 | 第42-43页 |
| 3.3.4 蛋白表达 | 第43-44页 |
| 3.3.5 蛋白纯化 | 第44页 |
| 3.3.6 SDS-PAGE | 第44-45页 |
| 3.3.7. Brandford法蛋白浓度测定 | 第45-46页 |
| 3.4 实验结果与分析 | 第46-50页 |
| 3.4.1 重组杆粒鉴定 | 第46-48页 |
| 3.4.2 几丁质酶SDS-PAGE | 第48页 |
| 3.4.3 蛋白表达量 | 第48-50页 |
| 3.5 本章小结 | 第50-51页 |
| 第四章 酶学性质的研究 | 第51-63页 |
| 4.1 引言 | 第51页 |
| 4.2 实验材料 | 第51-52页 |
| 4.2.1 实验试剂 | 第51页 |
| 4.2.2 实验仪器 | 第51-52页 |
| 4.3 实验方法 | 第52-54页 |
| 4.3.1 4-甲基伞形酮（4-MU）标准曲线绘制 | 第52页 |
| 4.3.2 几丁质酶学性质的测定 | 第52-53页 |
| 4.3.3 动力学参数的测定 | 第53-54页 |
| 4.4 结果与讨论 | 第54-62页 |
| 4.4.1 4-MU标准曲线绘制 | 第54页 |
| 4.4.2 几丁质酶的酶学性质 | 第54-60页 |
| 4.4.3 几丁质酶动力学参数的测定 | 第60页 |
| 4.4.4 D143，D145，W146残基作用分析 | 第60-62页 |
| 4.5 本章小结 | 第62-63页 |
| 第五章 总结与展望 | 第63-67页 |
| 5.1 全文总结 | 第63-64页 |
| 5.2 展望 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-75页 |
| 致谢 | 第75-77页 |
| 攻读学位期间学术成果 | 第77页 |
