| 摘要 | 第3-6页 |
| ABSTRACT | 第6-9页 |
| 第一章 绪论 | 第14-30页 |
| 1.1 手性化合物及手性二醇简介 | 第14-17页 |
| 1.1.1 手性化合物 | 第14页 |
| 1.1.2 手性二醇 | 第14-15页 |
| 1.1.3 手性二醇的合成方法 | 第15-17页 |
| 1.2 羰基还原酶简介 | 第17-19页 |
| 1.2.1 羰基还原酶来源 | 第17-18页 |
| 1.2.2 羰基还原酶催化机制 | 第18-19页 |
| 1.2.3 羰基还原酶工业应用存在的缺陷 | 第19页 |
| 1.3 新型羰基还原酶的挖掘 | 第19-22页 |
| 1.3.1 通过传统筛酶法获取羰基还原酶 | 第20-21页 |
| 1.3.2 通过基因重组技术获取羰基还原酶 | 第21-22页 |
| 1.4 辅酶再生系统的构建 | 第22-25页 |
| 1.4.1 生物法底物偶联辅酶再生 | 第23-24页 |
| 1.4.2 生物法酶法偶联辅酶再生 | 第24-25页 |
| 1.5 羰基还原酶不对称还原制备手性苯乙二醇概述 | 第25-26页 |
| 1.5.1 手性苯乙二醇性质及用途 | 第25-26页 |
| 1.5.2 羰基还原酶不对称还原制备苯乙二醇国内外研究进展 | 第26页 |
| 1.6 本论文背景意义及主要内容 | 第26-30页 |
| 第二章 (R)-和(S)-羰基还原酶的克隆与表达 | 第30-46页 |
| 2.1 引言 | 第30页 |
| 2.2 实验材料 | 第30-33页 |
| 2.2.1 实验药品 | 第30-31页 |
| 2.2.2 实验仪器 | 第31-32页 |
| 2.2.3 试剂配置 | 第32-33页 |
| 2.3 分析方法 | 第33-34页 |
| 2.3.1 气相色谱(GC)检测法 | 第33-34页 |
| 2.4 实验方法 | 第34-38页 |
| 2.4.1 羰基还原酶基因挖掘 | 第34页 |
| 2.4.2 PCR扩增 | 第34-35页 |
| 2.4.3 表达载体的构建 | 第35-37页 |
| 2.4.4 重组质粒的验证 | 第37页 |
| 2.4.5 重组羰基还原酶的诱导表达 | 第37-38页 |
| 2.4.6 重组羰基还原酶SDS-PAGE电泳 | 第38页 |
| 2.5 实验结果 | 第38-43页 |
| 2.5.1 羰基还原酶的筛选 | 第38-41页 |
| 2.5.2 羰基还原酶的克隆与表达 | 第41-43页 |
| 2.6 本章小结 | 第43-46页 |
| 第三章 (R)-和(S)-羰基还原酶的酶学性质研究 | 第46-56页 |
| 3.1 引言 | 第46页 |
| 3.2 实验材料 | 第46-47页 |
| 3.2.1 实验仪器 | 第46-47页 |
| 3.2.2 菌种及质粒 | 第47页 |
| 3.3 分析方法 | 第47页 |
| 3.3.1 羰基还原酶酶活测定 | 第47页 |
| 3.3.2 蛋白浓度测定 | 第47页 |
| 3.4 实验方法 | 第47-49页 |
| 3.4.1 重组羰基还原酶的纯化 | 第47-48页 |
| 3.4.2 羰基还原酶酶学性质研究 | 第48-49页 |
| 3.5 实验结果 | 第49-55页 |
| 3.5.1 重组羰基还原酶的纯化 | 第49页 |
| 3.5.2 酶的最适pH | 第49-50页 |
| 3.5.3 酶的pH稳定性 | 第50-51页 |
| 3.5.4 酶的最适温度 | 第51页 |
| 3.5.5 酶的温度稳定性 | 第51-52页 |
| 3.5.6 酶的动力学参数 | 第52-53页 |
| 3.5.7 不同DMSO浓度对酶活的影响 | 第53-54页 |
| 3.5.8 不同底物浓度对酶活的影响 | 第54-55页 |
| 3.6 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 共表达重组菌催化不对称还原 | 第56-72页 |
| 4.1 引言 | 第56页 |
| 4.2 实验材料 | 第56-57页 |
| 4.2.1 实验仪器 | 第56页 |
| 4.2.2 药品与试剂 | 第56-57页 |
| 4.3 分析方法 | 第57页 |
| 4.3.1 葡萄糖脱氢酶酶活测定 | 第57页 |
| 4.3.2 气相色谱(GC)检测法 | 第57页 |
| 4.4 实验方法 | 第57-61页 |
| 4.4.1 葡萄糖脱氢酶的克隆与表达 | 第57-59页 |
| 4.4.2 体外双酶偶联体系的构建 | 第59页 |
| 4.4.3 重组大肠杆菌双酶偶联共表达体系的构建 | 第59-60页 |
| 4.4.4 共表达重组菌全细胞不对称还原反应条件优化 | 第60页 |
| 4.4.5 共表达重组菌全细胞不对称还原反应过程 | 第60-61页 |
| 4.5 实验结果与分析 | 第61-69页 |
| 4.5.1 GDH的克隆与表达 | 第61-63页 |
| 4.5.2 体外双酶偶联催化体系的构建 | 第63-64页 |
| 4.5.3 体外双酶偶联不对称还原过程 | 第64页 |
| 4.5.4 重组大肠杆菌双酶偶联共表达体系的构建 | 第64-65页 |
| 4.5.5 共表达重组菌全细胞不对称还原反应温度优化 | 第65-66页 |
| 4.5.6 共表达重组菌全细胞不对称还原反应pH优化 | 第66-67页 |
| 4.5.7 共表达重组菌全细胞不对称还原反应底物浓度优化 | 第67-68页 |
| 4.5.8 共表达重组菌全细胞不对称还原反应细胞浓度优化 | 第68页 |
| 4.5.9 共表达重组菌全细胞不对称还原反应过程 | 第68-69页 |
| 4.6 本章小结 | 第69-72页 |
| 第五章 主要结论与展望 | 第72-74页 |
| 5.1 主要结论 | 第72-73页 |
| 5.2 展望 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-84页 |
| 附录 | 第84-86页 |
| 致谢 | 第86-88页 |
| 攻读学位期间学术成果 | 第88页 |
