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基于缺碱基位点和核酸—酶缀合物的探针体系及机理研究

摘要第3-4页
Abstract第4-5页
主要符号对照表第9-10页
第1章 引言第10-33页
    1.1 功能核酸概述第10-16页
        1.1.1 功能核酸的优势第10页
        1.1.2 功能核酸的分类第10-13页
        1.1.3 功能核酸的相关机理研究第13-16页
    1.2 基于功能核酸的荧光探针第16-23页
        1.2.1 标记型功能核酸荧光探针第16-19页
        1.2.2 非标记型功能核酸荧光探针第19-23页
    1.3 缺碱基位点第23-28页
        1.3.1 缺碱基位点的产生与修复第23-25页
        1.3.2 缺碱基位点的应用第25-28页
    1.4 核酸-酶缀合物第28-31页
        1.4.1 核酸-酶缀合物的合成第28-29页
        1.4.2 核酸-酶缀合物的分析应用第29-31页
    1.5 论文的研究目标和研究内容第31-33页
第2章 新型非共价标记法检测尿嘧啶糖基化酶活性第33-53页
    2.1 引言第33-34页
    2.2 实验部分第34-37页
        2.2.1 试剂第34-35页
        2.2.2 仪器第35页
        2.2.3 2-氨基-5,6,7-三甲基-1,8-萘啶(ATMND)的合成第35页
        2.2.4 含空位的DNA与含缺碱基位点的DNA底物比较第35-36页
        2.2.5 细胞裂解液的制备第36页
        2.2.6 尿嘧啶糖基化酶活性的的测定及抑制第36-37页
        2.2.7 尿嘧啶糖基化酶移除碱基的动力学测定第37页
    2.3 结果与讨论第37-51页
        2.3.1 实验原理第37-38页
        2.3.2 实验条件的优化第38-42页
        2.3.3 在缓冲液中测定尿嘧啶糖基化酶的工作曲线和检测限第42-44页
        2.3.4 动力学方法测定尿嘧啶糖基化酶对不同位置碱基修复的偏好第44-46页
        2.3.5 尿嘧啶糖基化酶抑制蛋白活性第46-47页
        2.3.6 小分子药物的半抑制浓度测定第47-48页
        2.3.7 测定真核细胞裂解液中的尿嘧啶糖基化酶活性第48-51页
    2.4 本章小结第51-53页
第3章利用插入缺碱基位点的方法探究核酸酶作用机理第53-65页
    3.1 引言第53-54页
    3.2 实验部分第54-57页
        3.2.1 试剂第54-56页
        3.2.2 仪器第56页
        3.2.3 MALDI-TOF-MS基质的配制第56页
        3.2.4 生成缺碱基位点第56页
        3.2.5 测定不同核酸酶切断底物的荧光增强速率第56-57页
    3.3 结果与讨论第57-64页
        3.3.1 实验原理第57-58页
        3.3.2 尿嘧啶糖基化酶切除尿嘧啶碱基前后的分子量变化以及对核酸酶活性的影响第58-59页
        3.3.3 碱基修饰对荧光增强速率影响第59-60页
        3.3.4 17E核酸酶的结构及催化机理研究第60-62页
        3.3.5 39E核酸酶的结构及催化机理研究第62-64页
    3.4 本章小结第64-65页
第4章 核酸-酶缀合物构建高效可逆催化荧光探针体系第65-76页
    4.1 引言第65页
    4.2 实验部分第65-68页
        4.2.1 试剂第65-66页
        4.2.2 仪器第66页
        4.2.3 DNA-腺苷脱氨酶缀合物的合成第66-67页
        4.2.4 生物素修饰的DNA对磁球的表面修饰第67页
        4.2.5 活性测定第67页
        4.2.6 荧光测定第67-68页
    4.3 结果与讨论第68-75页
        4.3.1 实验原理第68-69页
        4.3.2 DNA-腺苷脱氨酶缀合物的表征第69-71页
        4.3.3 磁球负载DNA效率的测定第71页
        4.3.4 腺苷释放核酸-酶缀合物的实验第71-72页
        4.3.5 外加腺苷脱氨酶的影响第72-74页
        4.3.6 体系的可逆性第74-75页
    4.4 本章小结第75-76页
第5章 全文总结第76-78页
参考文献第78-92页
致谢第92-94页
个人简历、在学期间发表的学术论文与研究成果第94页

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