| 摘要 | 第4-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 前言 | 第9-19页 |
| 1.1 研究背景 | 第9-11页 |
| 1.1.1 β-胡萝卜素 | 第9页 |
| 1.1.2 β-胡萝卜素的生产方法 | 第9-10页 |
| 1.1.3 甘油的生成现状和再利用前景 | 第10-11页 |
| 1.2 国内外研究进展及发展趋势 | 第11-16页 |
| 1.2.1 大肠杆菌中β-胡萝卜素的生物合成及代谢调控 | 第11-12页 |
| 1.2.2 大肠杆菌代谢甘油生产β-胡萝卜素 | 第12-14页 |
| 1.2.3 调控转氢酶和NAD激酶解决辅因子NADPH供给 | 第14-15页 |
| 1.2.4 代谢工程的基因表达调控策略 | 第15-16页 |
| 1.3 研究目的、意义及研究内容 | 第16-19页 |
| 1.3.1 研究的目的及意义 | 第16页 |
| 1.3.2 研究内容 | 第16-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-37页 |
| 2.1 材料 | 第19-25页 |
| 2.1.1 主要试剂 | 第19-20页 |
| 2.1.2 仪器和设备 | 第20页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第20-22页 |
| 2.1.4 引物 | 第22-24页 |
| 2.1.5 培养基 | 第24-25页 |
| 2.2 实验方法 | 第25-28页 |
| 2.2.1 菌种培养方法 | 第25页 |
| 2.2.2 分析方法和检测方法 | 第25页 |
| 2.2.3 大肠杆菌的遗传改造方法 | 第25-28页 |
| 2.3 优化转氢酶和NAD激酶表达 | 第28-31页 |
| 2.3.1 用三种固定强度的启动子对pntAB和yfjB分别进行单基因调控 | 第28-31页 |
| 2.3.2 用三种固定强度的启动子对pntAB和yfjB进行组合调控 | 第31页 |
| 2.4 优化调控甘油代谢途径 | 第31-35页 |
| 2.4.1 两步同源重组敲除glpR基因 | 第31-32页 |
| 2.4.2 用三种固定强度的启动子对glpFK、glpD和tpiA分别进行单基因调控 | 第32-33页 |
| 2.4.3 从Gly003菌株出发顺着代谢流依次对glpD和tpiA进行组合调控 | 第33-34页 |
| 2.4.4 从Gly016菌株出发分别对glpFK基因的启动子进行恢复和mRSL库调控 | 第34-35页 |
| 2.5 组合调控NADPH合成和甘油代谢途径 | 第35-37页 |
| 2.5.1 从Gly005菌株出发用M1-46对yfjB基因进行调控 | 第35-36页 |
| 2.5.2 从Gly016菌株出发用M1-46对yfjB基因进行调控 | 第36-37页 |
| 3 结果与讨论 | 第37-57页 |
| 3.1 β-胡萝卜素标准曲线的绘制及产量的计算 | 第37页 |
| 3.2 优化NADPH合成 | 第37-43页 |
| 3.2.1 pntAB和yfjB基因组水平的单基因调控 | 第38-41页 |
| 3.2.2 pntAB和yfjB基因的组合调控 | 第41-43页 |
| 3.3 优化甘油代谢途径 | 第43-55页 |
| 3.3.1 glpR基因的敲除 | 第43-44页 |
| 3.3.2 glpFK、glpD和tpiA基因组水平的单基因调控 | 第44-47页 |
| 3.3.3 从Gly003菌株出发顺着代谢流依次对glpD和tpiA基因进行组合调控 | 第47-51页 |
| 3.3.4 从Gly016菌株出发分别对glpFK基因的启动子进行恢复和mRSL库调控 | 第51-55页 |
| 3.4 NADPH合成和甘油代谢途径最优调控效果组合 | 第55-57页 |
| 4 结论 | 第57-58页 |
| 5 展望 | 第58-59页 |
| 6 参考文献 | 第59-67页 |
| 7 攻读硕士学位期间发表论文情况 | 第67-68页 |
| 8 致谢 | 第68页 |
