| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4页 |
| 第一章 绪论 | 第8-14页 |
| 1.1 固定化酶简述 | 第8页 |
| 1.2 固定化酶的研究与应用 | 第8-9页 |
| 1.3 酿酒酵母孢子概述 | 第9-11页 |
| 1.3.1 酿酒酵母孢子的形成过程 | 第9-10页 |
| 1.3.2 酿酒酵母孢子壁的组装 | 第10-11页 |
| 1.4 酿酒酵母孢子固定化酶 | 第11-12页 |
| 1.4.1 酿酒酵母孢子生物法固定化酶 | 第11-12页 |
| 1.4.2 酿酒酵母孢子化学法固定化酶 | 第12页 |
| 1.5 本论文的研究意义及主要内容 | 第12-14页 |
| 1.5.1 论文的研究意义 | 第12-13页 |
| 1.5.2 论文的主要研究内容 | 第13-14页 |
| 第二章 材料与方法 | 第14-26页 |
| 2.1 材料 | 第14-19页 |
| 2.1.1 菌株与质粒 | 第14-15页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第15页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第15-16页 |
| 2.1.4 培养基 | 第16-17页 |
| 2.1.5 溶液制备 | 第17-19页 |
| 2.2 实验方法 | 第19-26页 |
| 2.2.1 质粒构建过程 | 第19-20页 |
| 2.2.2 制备感受态细胞 | 第20页 |
| 2.2.3 质粒一步转化酵母 | 第20页 |
| 2.2.4 线性DNA LiAc法转化酵母 | 第20-21页 |
| 2.2.5 提取酵母基因组 | 第21页 |
| 2.2.6 构建质粒 | 第21页 |
| 2.2.7 敲基因构建突变株 | 第21页 |
| 2.2.8 α-半乳糖苷酶（Mel1p）在酿酒酵母孢子上的表达、固定和纯化 | 第21-22页 |
| 2.2.9 α-半乳糖苷酶活性检测 | 第22-24页 |
| 2.2.10 游离酶的制备和孢子固定化酶保护性实验检测 | 第24-25页 |
| 2.2.11 Western blot分析孢子固定化酶表达量 | 第25-26页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第26-37页 |
| 3.1 质粒与突变菌株的构建 | 第26-28页 |
| 3.1.1 构建 α-半乳糖苷酶表达质粒 | 第26页 |
| 3.1.2 构建双基因缺陷型突变菌株 | 第26-28页 |
| 3.2 筛选孢子固定化酶最优突变株 | 第28-32页 |
| 3.2.1 突变株孢子固定化酶活性测定 | 第28-31页 |
| 3.2.2 孢子固定化酶稳定性测定 | 第31-32页 |
| 3.3 AN120野生型与osw2?突变株酵母孢子壁孔径大小对比 | 第32-34页 |
| 3.4 孢子微囊球固定酶可抵抗一定浓度SDS的处理 | 第34-35页 |
| 3.5 酶活测定与蛋白免疫印迹分析尿素对孢子微囊球固定酶的影响 | 第35-37页 |
| 主要结论与展望 | 第37-39页 |
| 致谢 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-43页 |
| 附录：作者在攻读硕士学位期间发表的论文 | 第43页 |
