| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-7页 |
| 缩略语表 | 第10-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-22页 |
| 1.1 肝再生增强因子（ALR） | 第12-16页 |
| 1.1.1 ALR的发现 | 第12-13页 |
| 1.1.2 ALR的分子结构和理化性质 | 第13-14页 |
| 1.1.3 ALR的生物学功能 | 第14-15页 |
| 1.1.4 ALR与疾病 | 第15-16页 |
| 1.2 毕赤酵母表达系统 | 第16-18页 |
| 1.2.1 毕赤酵母表达系统 | 第16-17页 |
| 1.2.2 影响外源蛋白的表达因素 | 第17-18页 |
| 1.3 重组蛋白的分离纯化 | 第18-20页 |
| 1.4 本文的目的与意义 | 第20-22页 |
| 1.4.1 目的 | 第20-21页 |
| 1.4.2 意义 | 第21-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-40页 |
| 2.1 实验器材 | 第22-27页 |
| 2.1.1 主要仪器 | 第22-23页 |
| 2.1.2 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.3 常用试剂配制 | 第24-27页 |
| 2.2 试验方法 | 第27-40页 |
| 2.2.1 rALR基因序列的设计、载体构建及鉴定 | 第27-30页 |
| 2.2.2 转化毕赤酵母X-33、GS115及SMD1168及阳性克隆鉴定 | 第30-35页 |
| 2.2.3 摇瓶中的最佳表达条件试验 | 第35页 |
| 2.2.4 中试规模诱导表达 | 第35-37页 |
| 2.2.5 分离纯化条件优化 | 第37-38页 |
| 2.2.6 ALR的双向电泳（IEF/SDS-PAGE，2D） | 第38页 |
| 2.2.7 ALR的 2D/MS定性： | 第38页 |
| 2.2.8 rALR巯基氧化酶活性检测 | 第38-39页 |
| 2.2.9 体外活性测定 | 第39页 |
| 2.2.10 体内活性测 | 第39-40页 |
| 第三章 实验结果 | 第40-56页 |
| 3.1 rALR表达质粒的鉴定结果 | 第40-41页 |
| 3.2 阳性克隆的筛选、诱导表达及鉴定 | 第41-43页 |
| 3.3 rALR的摇瓶表达条件优化 | 第43页 |
| 3.4 rALR的3L规模发酵 | 第43-47页 |
| 3.4.1 不同起始诱导菌体密度优化 | 第44页 |
| 3.4.2 溶氧体积分数优化 | 第44-45页 |
| 3.4.3 甲醇浓度优化 | 第45-46页 |
| 3.4.4 诱导时间优化 | 第46-47页 |
| 3.5 10L和50L中试结果 | 第47-48页 |
| 3.6 rALR分离纯化条件优化 | 第48页 |
| 3.6.150mL双水相优化结果 | 第48-53页 |
| 3.6.2 双水相体系放大 | 第48-49页 |
| 3.6.3 rALR分离纯化结果 | 第49-50页 |
| 3.6.4 质谱鉴定结果 | 第50-53页 |
| 3.7 rALR蛋白巯基氧化酶活性 | 第53-56页 |
| 3.7.1 体外活性 | 第54页 |
| 3.7.2 体内活性 | 第54-56页 |
| 第四章 讨论 | 第56-60页 |
| 参考文献 | 第60-68页 |
| 致谢 | 第68-70页 |
| 攻读硕士学位期间参加的科研项目及已发表的论文 | 第70-71页 |
