| 符号说明 | 第4-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| Abstract | 第10-11页 |
| 1 前言 | 第12-23页 |
| 1.1 植物MVA和MEP途径简介 | 第12-13页 |
| 1.2 萜类化合物合成与调控 | 第13-17页 |
| 1.2.1 萜类化合物生物合成 | 第13-14页 |
| 1.2.1.1 异戊二烯C5单元的异构化与中间体的形成 | 第13-14页 |
| 1.2.1.2 异戊二烯转化和萜类合酶功能 | 第14页 |
| 1.2.2 萜类代谢途径调控 | 第14-17页 |
| 1.2.2.1 植物代谢网络与调控 | 第14-15页 |
| 1.2.2.2 光与其他外界因素对萜类代谢的调控 | 第15-17页 |
| 1.2.2.3 萜类代谢交流 | 第17页 |
| 1.3 萜类代谢物的功能 | 第17-19页 |
| 1.4 α-法尼烯与α-法尼烯合酶 | 第19-20页 |
| 1.4.1 α-法尼烯 | 第19页 |
| 1.4.2 α-法尼烯合酶 | 第19-20页 |
| 1.5 倍萜类合酶代谢工程 | 第20页 |
| 1.6 Rubsico启动子 | 第20-21页 |
| 1.7 顶空固相微萃取技术 | 第21-22页 |
| 1.8 本研究目的和意义 | 第22-23页 |
| 2 材料与方法 | 第23-39页 |
| 2.1 实验材料 | 第23-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第23页 |
| 2.1.2 材料的培养与处理 | 第23页 |
| 2.1.3 菌株与质粒 | 第23页 |
| 2.1.4 酶与生化试剂 | 第23-24页 |
| 2.1.5 PCR引物 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-39页 |
| 2.2.1 总RNA提取 | 第24-25页 |
| 2.2.2 cDNA第一条链的合成 | 第25-26页 |
| 2.2.3 基因克隆 | 第26页 |
| 2.2.4 真核表达载体构建 | 第26-31页 |
| 2.2.4.1 不同定位载体构建 | 第26-27页 |
| 2.2.4.2 连接 | 第27-28页 |
| 2.2.4.3 大肠杆菌感受态细胞制备 | 第28页 |
| 2.2.4.4 转化与克隆筛选 | 第28页 |
| 2.2.4.5 质粒提取 | 第28-29页 |
| 2.2.4.6 酶切与回收 | 第29-30页 |
| 2.2.4.7 农杆菌GV3101感受态细胞制备 | 第30页 |
| 2.2.4.8 冻融法转化农杆菌 | 第30页 |
| 2.2.4.9 花序侵染法转化拟南芥 | 第30-31页 |
| 2.2.5 转基因植株鉴定 | 第31-32页 |
| 2.2.5.1 CTAB法提取植物叶片基因组DNA | 第31-32页 |
| 2.2.5.2 转基因植株PCR扩增 | 第32页 |
| 2.2.6 qRT-PCR鉴定转基因拟南芥中AFS转录水平 | 第32-33页 |
| 2.2.7 萜类代谢相关指标测定 | 第33-35页 |
| 2.2.7.1 不同发育时期色素测定 | 第33页 |
| 2.2.7.2 不同发育时期萜类合成途径关键酶基因表达 | 第33页 |
| 2.2.7.3 顶空固相微萃取测定拟南芥挥发物 | 第33-34页 |
| 2.2.7.4 GC-MS测定拟南芥中甾醇 | 第34-35页 |
| 2.2.8 MdAFS亚细胞定位 | 第35-36页 |
| 2.2.8.1 构建瞬时表达载体 | 第35页 |
| 2.2.8.2 瞬时表达本生烟 | 第35-36页 |
| 2.2.9 转基因和野生型拟南芥生理指标测定 | 第36-39页 |
| 2.2.9.1 拟南芥抗氧化能力测定 | 第36页 |
| 2.2.9.2 抗氧化酶测定 | 第36-37页 |
| 2.2.9.3 H_2O_2含量测定 | 第37页 |
| 2.2.9.4 DAB和NBT染色 | 第37页 |
| 2.2.9.5 相对电导率的测定 | 第37-39页 |
| 3 结果与分析 | 第39-54页 |
| 3.1 MdAFS、Rubisco启动子（rbcS1）和叶绿体定位肽（Pla）基因克隆 | 第39页 |
| 3.2 MdAFS蛋白亚细胞定位 | 第39页 |
| 3.3 MdAFS在不同非生物胁迫和激素诱导下的表达分析 | 第39-40页 |
| 3.4 MdAFS基因在拟南芥中的遗传转化 | 第40-42页 |
| 3.5 转基因植株次生代谢物变化 | 第42-50页 |
| 3.5.1 MdAFS基因过表达提高了转基因拟南芥的光合色素含量 | 第42-43页 |
| 3.5.2 过表达MdAFS基因对种子中ABA积累的影响 | 第43页 |
| 3.5.3 MdAFS基因过表达影响了拟南芥中萜类合成代谢途径基因的表达水平 | 第43-44页 |
| 3.5.4 MdAFS基因过表达影响了转基因拟南芥的甾醇含量 | 第44-47页 |
| 3.5.5 MdAFS基因过表达转基因拟南芥挥发物变化 | 第47-50页 |
| 3.6 MdAFS基因过表达提高了拟南芥的抗氧化胁迫能力 | 第50-54页 |
| 3.6.1 MdAFS基因过表达减轻了MV处理对拟南芥叶片的光漂白作用 | 第50页 |
| 3.6.2 MdAFS基因过表达对氧化胁迫下拟南芥Fv/Fm的影响 | 第50-51页 |
| 3.6.3 MdAFS基因过表达对氧化胁迫下拟南芥膜稳定性的影响 | 第51页 |
| 3.6.4 MdAFS基因过表达对活性氧积累的影响 | 第51-52页 |
| 3.6.5 MdAFS基因过表达对氧化胁迫下抗氧化酶活性的影响 | 第52-54页 |
| 4 讨论 | 第54-58页 |
| 4.1 MdAFS表达被多种因素诱导 | 第54页 |
| 4.2 过表达MdAFS增加了光合色素的积累 | 第54-55页 |
| 4.3 MdAFS过表达影响了萜类代谢途径基因的表达 | 第55-56页 |
| 4.4 过表达MdAFS增加了萜类挥发物释放 | 第56-57页 |
| 4.5 MdAFS的表达增强了转基因拟南芥的抗氧化能力 | 第57-58页 |
| 5 结论 | 第58-59页 |
| 参考 文献 | 第59-70页 |
| 致谢 | 第70-71页 |
| 攻读学位期间发表的论文及成果 | 第71页 |
