| 符号说明 | 第4-9页 |
| 中文摘要 | 第9-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 前言 | 第13-22页 |
| 1.1 NAC转录因子研究进展 | 第13-15页 |
| 1.1.1 NAC转录因子的结构及分类 | 第13页 |
| 1.1.2 NAC转录因子的生物学功能 | 第13-15页 |
| 1.1.2.1 NAC转录因子参与生长发育中的调控 | 第14页 |
| 1.1.2.2 NAC转录因子参与非生物胁迫的响应 | 第14-15页 |
| 1.1.2.3 NAC转录因子参与生物胁迫的响应 | 第15页 |
| 1.2 高温胁迫对植物的影响 | 第15-17页 |
| 1.2.1 高温胁迫与植物抗氧化系统 | 第15-16页 |
| 1.2.2 高温胁迫与植物的生物膜系统 | 第16页 |
| 1.2.3 高温胁迫与植物的渗透调节物质 | 第16-17页 |
| 1.2.4 高温胁迫与植物的热激蛋白 | 第17页 |
| 1.3 SA参与高温胁迫的调控 | 第17-20页 |
| 1.3.1 SA在生物胁迫中的作用 | 第17-18页 |
| 1.3.2 SA在高温胁迫中的作用 | 第18-20页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第20-22页 |
| 2 材料与方法 | 第22-40页 |
| 2.1 实验材料 | 第22-23页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第22页 |
| 2.1.2 材料处理 | 第22页 |
| 2.1.3 菌株和质粒 | 第22页 |
| 2.1.4 酶及生化试剂 | 第22-23页 |
| 2.1.5 PCR引物及qPCR引物 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-40页 |
| 2.2.1 植物总RNA的提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 反转录cDNA第一条链的合成 | 第24-25页 |
| 2.2.3 SlJA2转录因子的分离与克隆 | 第25-26页 |
| 2.2.3.1 PCR反应扩增目的片段 | 第25-26页 |
| 2.2.3.2 SlJA2目的片段的回收 | 第26页 |
| 2.2.4 目的片段与克隆载体的连接 | 第26-27页 |
| 2.2.5 大肠杆菌感受态的制备及载体的转化 | 第27页 |
| 2.2.5.1 大肠杆菌感受态的制备 | 第27页 |
| 2.2.5.2 大肠杆菌的转化及阳性克隆的筛选 | 第27页 |
| 2.2.6 大肠杆菌质粒的提取 | 第27-28页 |
| 2.2.7 重组克隆载体的酶切鉴定 | 第28页 |
| 2.2.8 DNA序列测定 | 第28页 |
| 2.2.9 SlJA2的亚细胞定位 | 第28-30页 |
| 2.2.9.1 p1300-SlJA2-GFP定位载体的构建 | 第28-29页 |
| 2.2.9.2 根癌农杆菌感受态细胞的制备 | 第29页 |
| 2.2.9.3 冻融法转化农杆菌 | 第29-30页 |
| 2.2.9.4 瞬时转化本生烟草叶片 | 第30页 |
| 2.2.10 SlJA2启动子GUS组织化学分析 | 第30-31页 |
| 2.2.10.1 转化拟南芥植株 | 第30-31页 |
| 2.2.10.2 GUS组织化学分析 | 第31页 |
| 2.2.11 SlJA2的转录激活活性的验证 | 第31-33页 |
| 2.2.11.1 BD载体的构建 | 第31页 |
| 2.2.11.2 Y2H Gold酵母感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.11.3 酵母的转化及阳性克隆的筛选 | 第32-33页 |
| 2.2.11.4 转录激活活性的鉴定 | 第33页 |
| 2.2.12 真核表达载体的构建 | 第33页 |
| 2.2.13 转基因烟草的转化和鉴定 | 第33-36页 |
| 2.2.13.1 SDS法提取基因组DNA | 第34页 |
| 2.2.13.2 转基因烟草的PCR鉴定 | 第34-35页 |
| 2.2.13.3 转基因烟草的qRT-PCR检测 | 第35-36页 |
| 2.2.14 烟草种子的萌发实验 | 第36页 |
| 2.2.14.1 烟草种子的无菌处理 | 第36页 |
| 2.2.14.2 种子萌发及鲜重统计 | 第36页 |
| 2.2.15 烟草成苗的高温抗性分析 | 第36-37页 |
| 2.2.15.1 离体相对失水率的测定 | 第36页 |
| 2.2.15.2 气孔大小及密度的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.16 转基因烟草SA和ABA含量的测定 | 第37页 |
| 2.2.16.1 激素提取 | 第37页 |
| 2.2.16.2 液质检测 | 第37页 |
| 2.2.17 相关生理指标的测定 | 第37-39页 |
| 2.2.17.1 膜脂过氧化程度和电解质外渗量的测定 | 第37-38页 |
| 2.2.17.2 脯氨酸和可溶性糖含量的测定 | 第38页 |
| 2.2.17.3 光合速率的测定 | 第38页 |
| 2.2.17.4 叶绿素荧光参数的测定 | 第38页 |
| 2.2.17.5 H_2O_2 和 O_2~(·?)的染色分析和定量测定 | 第38-39页 |
| 2.2.17.6 抗氧化酶CAT和APX的测定 | 第39页 |
| 2.2.18 数据的处理与分析 | 第39-40页 |
| 3 结果与分析 | 第40-59页 |
| 3.1 番茄SlJA2基因的分离及序列特征 | 第40-42页 |
| 3.1.1 番茄SlJA2基因c DNA全长的克隆 | 第40页 |
| 3.1.2 SlJA2基因的序列分析及其编码的氨基酸序列分析 | 第40-42页 |
| 3.2 SlJA2蛋白的亚细胞定位 | 第42-43页 |
| 3.3 SlJA2蛋白转录激活活性的验证 | 第43-44页 |
| 3.4 SlJA2组织模式的分析 | 第44-45页 |
| 3.5 胁迫处理下SlJA2表达模式的分析 | 第45-46页 |
| 3.6 SlJA2在烟草中的遗传转化 | 第46-48页 |
| 3.6.1 SlJA2基因正义表达载体的构建 | 第46-47页 |
| 3.6.2 转基因烟草的获得和筛选 | 第47-48页 |
| 3.7 过表达SlJA2对转基因烟草的高温抗性的影响 | 第48-50页 |
| 3.7.1 过表达SlJA2降低了烟草种子的高温抗性 | 第48-49页 |
| 3.7.2 过表达SlJA2降低了烟草成苗的高温抗性 | 第49-50页 |
| 3.8 过表达SlJA2对烟草体内相关激素含量的影响 | 第50-52页 |
| 3.8.1 过表达SlJA2降低了高温胁迫下转基因烟草的SA含量 | 第50-51页 |
| 3.8.2 过表达SlJA2增加了高温胁迫下转基因烟草的ABA含量 | 第51-52页 |
| 3.9 过表达SlJA2对烟草光合参数的影响 | 第52-54页 |
| 3.9.1 过表达SlJA2抑制了转基因烟草的光合作用 | 第52-53页 |
| 3.9.2 过表达SlJA2降低了转基因烟草的叶绿素含量 | 第53-54页 |
| 3.10 过表达SlJA2对烟草体内活性氧的影响 | 第54-56页 |
| 3.10.1 过表达SlJA2增加了高温胁迫下烟草体内活性氧的积累 | 第54-55页 |
| 3.10.2 过表达SlJA2降低了高温胁迫下烟草体内抗氧化酶的活性 | 第55-56页 |
| 3.11 过表达SlJA2对烟草细胞膜的影响 | 第56-58页 |
| 3.11.1 过表达SlJA2增加了细胞膜过氧化程度 | 第56-57页 |
| 3.11.2 过表达SlJA2降低了烟草渗透调节物质的含量 | 第57-58页 |
| 3.12 过表达SlJA2降低了高温胁迫相关基因的表达 | 第58-59页 |
| 4 讨论 | 第59-62页 |
| 4.1 SlJA2是典型的NAC转录因子 | 第59页 |
| 4.2 SlJA2基因的表达模式 | 第59页 |
| 4.3 过表达SlJA2降低了转基因烟草的高温抗性 | 第59-60页 |
| 4.4 SlJA2可能通过SA途径调控高温下的气孔运动 | 第60-61页 |
| 4.5 SlJA2可能参与的高温调控通路 | 第61-62页 |
| 5 结论 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-69页 |
| 致谢 | 第69-70页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第70页 |
