| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 绪论 | 第13-27页 |
| 1.1 研究背景及意义 | 第13-14页 |
| 1.2 国内外本学科领域的发展现状与趋势 | 第14-24页 |
| 1.2.1 质体中脂肪酸从头合成 | 第15-16页 |
| 1.2.2 超长链脂肪酸合成 | 第16-18页 |
| 1.2.3 表皮蜡质合成途径 | 第18-20页 |
| 1.2.4 表皮蜡质转运 | 第20-21页 |
| 1.2.5 表皮蜡质合成调控基因 | 第21-24页 |
| 1.3 研究内容 | 第24-27页 |
| 第二章 材料与方法 | 第27-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第27-29页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第27页 |
| 2.1.2 菌株和载体 | 第27-28页 |
| 2.1.3 化学试剂 | 第28页 |
| 2.1.4 常用培养基 | 第28-29页 |
| 2.1.5 仪器与耗材 | 第29页 |
| 2.2 常用分子生物学实验方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 拟南芥DNA粗提取 | 第29-30页 |
| 2.2.2 CTAB方法提取拟南芥DNA | 第30页 |
| 2.2.3 Trizol方法拟南芥RNA | 第30-31页 |
| 2.2.4 酿酒酵母RNA提取 | 第31页 |
| 2.2.5 RNA反转录合成cDNA第一条链 | 第31-32页 |
| 2.2.6 常规聚合酶链式反应(PCR) | 第32页 |
| 2.2.7 载体构建用PCR反应 | 第32-33页 |
| 2.2.8 半定量RT-PCR | 第33页 |
| 2.2.9 荧光定量PCR | 第33-34页 |
| 2.2.10 限制性内切酶消化DNA | 第34页 |
| 2.2.11 DNA纯化回收 | 第34页 |
| 2.2.12 T4连接反应 | 第34-35页 |
| 2.2.13 大肠杆菌超级感受态细胞制备 | 第35页 |
| 2.2.14 大肠杆菌转化 | 第35页 |
| 2.2.15 大肠杆菌菌液PCR | 第35-36页 |
| 2.2.16 质粒提取 | 第36页 |
| 2.2.17 酿酒酵母转化 | 第36页 |
| 2.2.18 酵母菌液PCR | 第36-37页 |
| 2.2.19 农杆菌感受态细胞制备 | 第37页 |
| 2.2.20 农杆菌转化 | 第37页 |
| 2.2.21 农杆菌菌落PCR | 第37页 |
| 2.3 常用生理生化实验方法 | 第37-40页 |
| 2.3.1 农杆菌转化拟南芥 | 第37-38页 |
| 2.3.2 拟南芥转基因种子筛选 | 第38页 |
| 2.3.3 拟南芥的有性杂交 | 第38页 |
| 2.3.4 失水实验 | 第38-39页 |
| 2.3.5 甲苯胺蓝染色(TB staining) | 第39页 |
| 2.3.6 GUS组织化学染色分析 | 第39页 |
| 2.3.7 表皮蜡质结构扫描电子显微镜观察 | 第39-40页 |
| 2.3.8 拟南芥原生质体转化 | 第40页 |
| 2.3.9 烟草表皮细胞瞬时转化 | 第40页 |
| 2.4 常用色谱分析方法 | 第40-47页 |
| 2.4.1 拟南芥表皮蜡质含量测定 | 第40-41页 |
| 2.4.2 薄层色谱方法分离表皮蜡质组分 | 第41-42页 |
| 2.4.3 拟南芥表皮层角质单体含量测定 | 第42-43页 |
| 2.4.4 酵母脂质组分测定 | 第43-47页 |
| 第三章 结果与分析 | 第47-91页 |
| 3.1 蜡质突变体cer17-1表型分析 | 第47-50页 |
| 3.1.1 蜡质突变体cer17-1的花序茎表皮蜡质晶体结构分析 | 第47-48页 |
| 3.1.2 蜡质突变体cer17-1花序茎表皮蜡质含量分析 | 第48-49页 |
| 3.1.3 小结 | 第49-50页 |
| 3.2 蜡质基因CER17的克隆 | 第50-58页 |
| 3.2.1 CER17基因精细定位 | 第50-51页 |
| 3.2.2 酵母异源表达验证mCER17功能 | 第51-55页 |
| 3.2.3 CER17/ADS4基因T-DNA插入突变体分离 | 第55-56页 |
| 3.2.4 等位测试 | 第56-57页 |
| 3.2.5 小结 | 第57-58页 |
| 3.3 CER17/ADS4蛋白亚细胞定位 | 第58-61页 |
| 3.3.1 ADS基因家族成员聚类分析 | 第58-59页 |
| 3.3.2 CER17蛋白亚细胞定位分析 | 第59-61页 |
| 3.4 CER17基因时空表达模式分析 | 第61-65页 |
| 3.4.1 ADS基因的基因芯片数据分析 | 第61-62页 |
| 3.4.2 qRT-PCR检测不同组织器官CER17/ADS4基因表达 | 第62页 |
| 3.4.3 GUS组织化学染色分析 | 第62-65页 |
| 3.5 cer17突变体花序茎顶部和基部表皮蜡质分析 | 第65-68页 |
| 3.5.1 蜡质突变体cer17花序茎表皮蜡质晶体结构分析 | 第65-66页 |
| 3.5.2 蜡质突变体cer17花序茎表皮蜡质含量分析 | 第66-68页 |
| 3.6 CER17/ADS4参与拟南芥表皮蜡质中超长链不饱和脂肪醇的合成 | 第68-71页 |
| 3.7 CER17和CER4基因共同参与超长链饱和脂肪醇的合成 | 第71-79页 |
| 3.7.1 CER17/ADS4蛋白底物分析 | 第71-73页 |
| 3.7.2 CER4参与超长链不饱和脂肪醇的合成 | 第73-74页 |
| 3.7.3 酿酒酵母中重建超长链不饱和脂肪醇合成途径 | 第74-79页 |
| 3.8 蜡质基因CER17参与角质合成通路的功能解析 | 第79-86页 |
| 3.8.1 CER17参与了角质合成 | 第79-81页 |
| 3.8.2 CER17与LACS1在表皮角质层结构的形成上存在遗传上相互作用 | 第81-85页 |
| 3.8.3 LACS2相对CER17基因表现为上位遗传 | 第85-86页 |
| 3.9 讨论 | 第86-91页 |
| 第四章 结论与展望 | 第91-93页 |
| 4.1 结论 | 第91页 |
| 4.2 研究展望 | 第91-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 附录A 引物汇总 | 第105-107页 |
| 附录B 载体图谱 | 第107-111页 |
| 附录C 缩略词表 | 第111-113页 |
| 致谢 | 第113-115页 |
| 作者简介及在学期间发表的学术论文与研究成果 | 第115页 |
