| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 缩略语表(Abbreviation) | 第10-12页 |
| 1 文献综述 | 第12-19页 |
| ·冠状病毒流行病学 | 第12-13页 |
| ·冠状病毒病原学特性 | 第13页 |
| ·冠状病毒S蛋白 | 第13-14页 |
| ·冠状病毒与宿主受体 | 第14-16页 |
| ·假病毒系统 | 第16-17页 |
| ·假病毒 | 第16页 |
| ·水疱性口炎病毒 | 第16页 |
| ·VSV-ΔG假病毒系统 | 第16-17页 |
| ·慢病毒载体 | 第17页 |
| ·荧光素酶报告基因 | 第17页 |
| ·PCR技术 | 第17-18页 |
| ·免疫荧光技术 | 第18页 |
| ·蛋白免疫印迹法 | 第18-19页 |
| 2 研究目的及意义 | 第19-20页 |
| 3 材料与方法 | 第20-34页 |
| ·实验材料 | 第20-23页 |
| ·毒株、细胞与质粒 | 第20页 |
| ·主要药品及试剂 | 第20页 |
| ·主要试剂配制 | 第20-22页 |
| ·细胞培养相关试剂 | 第20-21页 |
| ·细菌培养相关试剂 | 第21页 |
| ·Western blot相关试剂 | 第21-22页 |
| ·IFA相关试剂 | 第22页 |
| ·实验所用引物 | 第22-23页 |
| ·实验方法 | 第23-34页 |
| ·细胞传代培养 | 第23-24页 |
| ·基因克隆以及质粒构建 | 第24-28页 |
| ·目的基因的PCR扩增 | 第24页 |
| ·PCR产物的电泳与回收 | 第24-25页 |
| ·DNA片段和载体的酶切 | 第25-26页 |
| ·外源DNA片段与载体的连接反应 | 第26页 |
| ·外源DNA片段与载体的重组反应 | 第26页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备（氯化钙法） | 第26-27页 |
| ·连接产物的转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的提取 | 第27-28页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第28页 |
| ·脂质体转染细胞的方法 | 第28-29页 |
| ·Western Blot检测S蛋白的表达 | 第29页 |
| ·痘病毒(vTF7-3)的扩增 | 第29-30页 |
| ·PEDV和TGEV的扩增 | 第30页 |
| ·病毒滴度的测定 | 第30页 |
| ·VSV感染性克隆 | 第30-31页 |
| ·VSV-ΔG假病毒的构建 | 第31页 |
| ·VSV-ΔG-S假病毒的构建 | 第31-32页 |
| ·慢病毒假病毒系统构建冠状病毒S蛋白假病毒 | 第32页 |
| ·荧光素酶报告基因试剂盒检测 | 第32页 |
| ·IFA检测病毒的细胞嗜性 | 第32-33页 |
| ·统计学分析 | 第33-34页 |
| 4 结果与分析 | 第34-51页 |
| ·VSV感染性克隆 | 第34-35页 |
| ·VSV-ΔG-S假病毒的构建 | 第35-37页 |
| ·构建pVSVFLΔG-eGFP重组质粒 | 第35-36页 |
| ·VSV-ΔG假病毒构建 | 第36-37页 |
| ·VSV-ΔG假病毒的扩增及滴度测定 | 第37页 |
| ·冠状病毒S蛋白重组质粒的构建及表达 | 第37-41页 |
| ·S蛋白重组质粒的构建 | 第37-40页 |
| ·PCR扩增目的片段 | 第37-38页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第38-40页 |
| ·冠状病毒S蛋白在细胞中的表达 | 第40-41页 |
| ·冠状病毒S蛋白的同源性分析 | 第41-42页 |
| ·VSV-ΔG-S重组假毒的构建并感染不同细胞系 | 第42-43页 |
| ·利用慢病毒系统构建冠状病毒S假病毒并比较其细胞入侵效率 | 第43-44页 |
| ·TGEV-S和PEDV-S假病毒感染不同种属细胞系 | 第44-45页 |
| ·PEDV和TGEV活病毒的细胞嗜性 | 第45-47页 |
| ·不同种属来源的APN及PEDV、TGEV RBD序列比对 | 第47-48页 |
| ·讨论 | 第48-51页 |
| ·假病毒模型 | 第48页 |
| ·S蛋白介导冠状病毒入侵细胞 | 第48页 |
| ·冠状病毒的受体识别 | 第48-49页 |
| ·PEDV和TGEV的细胞嗜性 | 第49-51页 |
| 5 结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
