匍枝根霉组成型内切葡聚糖苷酶基因的克隆、表达及酶学性质研究
| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRAC | 第8-12页 |
| 目录 | 第12-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-27页 |
| ·前言 | 第15-16页 |
| ·纤维素及纤维素酶概述 | 第16-19页 |
| ·纤维素概述 | 第16-17页 |
| ·纤维素酶概述 | 第17-19页 |
| ·自然界中存在的纤维素酶 | 第19页 |
| ·纤维素酶基因表达调控机制 | 第19-23页 |
| ·纤维素的降解模型 | 第19-20页 |
| ·纤维素酶的诱导机制 | 第20页 |
| ·纤维素酶的阻遏机制 | 第20-21页 |
| ·纤维素酶合成调控因子 | 第21-23页 |
| ·国内外研究现状 | 第23-24页 |
| ·国外研究现状 | 第23-24页 |
| ·国内研究现状 | 第24页 |
| ·纤维素酶的应用 | 第24-25页 |
| ·研究目的和意义 | 第25-26页 |
| ·研究内容 | 第26-27页 |
| 第2章 组成型内切葡聚糖苷酶发酵条件优化 | 第27-37页 |
| ·材料和方法 | 第27-29页 |
| ·菌株及培养基 | 第27页 |
| ·常用缓冲液 | 第27-28页 |
| ·试剂及仪器 | 第28-29页 |
| ·酶活力测定 | 第29页 |
| ·实验方法 | 第29-31页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第29-30页 |
| ·匍枝根霉组成型纤维素酶的测定 | 第30页 |
| ·组成酶培养温度的优化 | 第30页 |
| ·组成酶摇床转速的优化 | 第30页 |
| ·组成酶装液量的优化 | 第30页 |
| ·组成型培养基pH的调控 | 第30页 |
| ·内切酶CMC-PAGE活性电泳 | 第30-31页 |
| ·结果与讨论 | 第31-35页 |
| ·葡萄糖标准曲线的绘制 | 第31页 |
| ·匍枝根霉组成型纤维素酶的测定 | 第31-32页 |
| ·组成酶培养温度的优化 | 第32页 |
| ·组成酶培养时摇床转速的优化 | 第32-33页 |
| ·组成酶培养时锥形瓶装液量的优化 | 第33页 |
| ·组成型培养基pH的调控 | 第33-34页 |
| ·匍枝根霉组成型内切葡聚糖苷酶优化后酶活曲线 | 第34-35页 |
| ·内切酶CMC-PAGE活性电泳 | 第35页 |
| ·本章小结 | 第35-37页 |
| 第3章 组成型内切葡聚糖苷酶基因的克隆 | 第37-51页 |
| ·实验材料 | 第37-38页 |
| ·菌种及载体 | 第37页 |
| ·培养基 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37-38页 |
| ·器材和仪器 | 第38页 |
| ·实验方法 | 第38-44页 |
| ·菌丝体预处理 | 第38-39页 |
| ·总RNA的提取 | 第39页 |
| ·mRNA的分离 | 第39-40页 |
| ·cDNA双链全长合成 | 第40-41页 |
| ·接头连接 | 第41页 |
| ·双酶切处理 | 第41页 |
| ·去除短链cDNA | 第41-42页 |
| ·质粒pET22的提取 | 第42页 |
| ·质粒pET22双酶切 | 第42-43页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第43页 |
| ·感受态的制备 | 第43页 |
| ·转化大肠杆菌 | 第43-44页 |
| ·目的基因的筛选及序列分析 | 第44页 |
| ·实验结果 | 第44-49页 |
| ·匍枝根霉组成型总RNA的提取 | 第44页 |
| ·匍枝根霉组成型mRNA纯度鉴定 | 第44-45页 |
| ·双链cDNA合成 | 第45页 |
| ·质粒pET22的提取 | 第45-46页 |
| ·目的基因的筛选 | 第46页 |
| ·zeg1和zeg2生物信息学分析 | 第46-49页 |
| ·本章小结 | 第49-51页 |
| 第4章 重组酶酶学性质研究 | 第51-62页 |
| ·材料和方法 | 第51-54页 |
| ·菌株及培养条件 | 第51页 |
| ·常用缓冲液 | 第51-53页 |
| ·试剂与仪器 | 第53-54页 |
| ·实验方法 | 第54-55页 |
| ·重组酶时间曲线 | 第54页 |
| ·重组酶的最适温度和最适pH | 第54页 |
| ·温度和pH对重组酶稳定性的影响 | 第54页 |
| ·金属离子对重组酶活性的影响 | 第54-55页 |
| ·重组酶分子量测定 | 第55页 |
| ·结果和讨论 | 第55-60页 |
| ·重组菌酶活测定 | 第55-56页 |
| ·重组酶的最适温度和pH | 第56页 |
| ·温度和pH对重组酶稳定性影响 | 第56-58页 |
| ·金属离子对重组酶活性的影响 | 第58-59页 |
| ·重组酶分子量测定 | 第59-60页 |
| ·本章小结 | 第60-62页 |
| 第5章 结论与展望 | 第62-64页 |
| ·结论 | 第62-63页 |
| ·展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-72页 |
| 攻读学位期间发表论文 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
