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人类心脏发育候选基因TRIM45及BZW2的蛋白相互作用研究及初步功能鉴定

摘要第1-5页
ABSTRACT第5-10页
第一章 引言和文献综述第10-25页
   ·心脏发育概述第10页
   ·心肌肥厚的特征第10-11页
   ·心肌肥厚过程中的重要信号转导途径第11-14页
     ·丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)途径第11-13页
     ·钙信号引起的心肌肥厚的转录机制第13-14页
   ·心脏发育以及心肌肥厚信号途径中的关键转录因子家族第14-20页
     ·GATA家族第14-15页
     ·NK家族第15-16页
     ·BMP家族第16页
     ·MADS框基因家族第16-18页
     ·HAND第18页
     ·NFAT家族第18-20页
   ·TRIM基因家族第20-23页
     ·TRIM家族概述第20页
     ·TRIM家族的结构特点第20-22页
     ·TRIM家族的进化第22-23页
   ·TRIM45基因的前期功能研究第23-25页
第二章 材料与方法第25-41页
   ·材料第25-29页
     ·生物信息学软件第25-26页
     ·主要试剂第26-27页
     ·质粒、细胞和菌株第27-29页
     ·主要实验仪器和耗材第29页
   ·方法第29-41页
     ·心脏组织和细胞总的RNA提取第29-30页
     ·引物设计与合成第30页
     ·PCR扩增第30-31页
     ·PCR产物纯化第31页
     ·载体连接第31-32页
     ·感受态细胞制备第32页
     ·连接产物的转化第32页
     ·质粒的小量制备第32-33页
     ·阳性克隆筛选和鉴定第33页
     ·测序第33-34页
     ·重组质粒的构建第34页
     ·真核表达重组质粒的大量制备第34-35页
     ·常规细胞的培养及转染第35-36页
     ·原核细胞诱导蛋白质表达及纯化第36页
     ·SDS-PAGE第36-37页
     ·BZW2原核表达的蛋白免疫兔子制备多克隆抗体第37页
     ·Western blot免疫印迹检测抗体效价第37页
     ·免疫共沉淀(CO-IP)第37-38页
     ·荧光报告系统分析第38-39页
     ·亚细胞定位分析第39页
     ·提取蛋白质第39页
     ·蛋白质印迹免疫检测(Western-blot)第39-41页
第三章 实验结果及其分析第41-60页
   ·人类DNAJB6基因的生物信息学分析结果第41-42页
   ·人类SLC25A3基因的生物信息学分析结果第42-44页
   ·TRIM45蛋白与DNAJB6蛋白在体内发生相互作用第44-45页
   ·TRIM45蛋白与SLC25A3蛋白在体内发生相互作用第45页
   ·TRIM45、DNAJB6、SLC25A3基因对心脏标志基因NFAT等的转录活性调控研究第45-48页
   ·TRIM45基因的拆片抑制NF-KB的转录活性第48-50页
   ·人类BZW2基因的生物信息学分析结果第50-52页
   ·BZW2开放阅读框(ORF)的克隆第52-53页
   ·BZW2的亚细胞定位分析第53-54页
   ·pGEX-4T-1-BZW2重组质粒的构建第54-56页
   ·BZW2融合蛋白表达第56页
   ·BZW2兔多克隆抗体制备和效价检测第56-57页
   ·BZW2蛋白在心脏,肌肉,脑组织中高表达第57-58页
   ·BZW2的相互作用蛋白预测分析第58-59页
   ·BZW2抑制NF-KB和NFAT的转录活性第59-60页
第四章 结语第60-62页
第五章 其他工作—LRRC39基因在肌原分化中的作用第62-64页
参考文献第64-71页
附录1第71-72页
附录2第72-73页
致谢第73-74页

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