摘要 | 第1-5页 |
ABSTRACT | 第5-10页 |
第一章 引言和文献综述 | 第10-25页 |
·心脏发育概述 | 第10页 |
·心肌肥厚的特征 | 第10-11页 |
·心肌肥厚过程中的重要信号转导途径 | 第11-14页 |
·丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)途径 | 第11-13页 |
·钙信号引起的心肌肥厚的转录机制 | 第13-14页 |
·心脏发育以及心肌肥厚信号途径中的关键转录因子家族 | 第14-20页 |
·GATA家族 | 第14-15页 |
·NK家族 | 第15-16页 |
·BMP家族 | 第16页 |
·MADS框基因家族 | 第16-18页 |
·HAND | 第18页 |
·NFAT家族 | 第18-20页 |
·TRIM基因家族 | 第20-23页 |
·TRIM家族概述 | 第20页 |
·TRIM家族的结构特点 | 第20-22页 |
·TRIM家族的进化 | 第22-23页 |
·TRIM45基因的前期功能研究 | 第23-25页 |
第二章 材料与方法 | 第25-41页 |
·材料 | 第25-29页 |
·生物信息学软件 | 第25-26页 |
·主要试剂 | 第26-27页 |
·质粒、细胞和菌株 | 第27-29页 |
·主要实验仪器和耗材 | 第29页 |
·方法 | 第29-41页 |
·心脏组织和细胞总的RNA提取 | 第29-30页 |
·引物设计与合成 | 第30页 |
·PCR扩增 | 第30-31页 |
·PCR产物纯化 | 第31页 |
·载体连接 | 第31-32页 |
·感受态细胞制备 | 第32页 |
·连接产物的转化 | 第32页 |
·质粒的小量制备 | 第32-33页 |
·阳性克隆筛选和鉴定 | 第33页 |
·测序 | 第33-34页 |
·重组质粒的构建 | 第34页 |
·真核表达重组质粒的大量制备 | 第34-35页 |
·常规细胞的培养及转染 | 第35-36页 |
·原核细胞诱导蛋白质表达及纯化 | 第36页 |
·SDS-PAGE | 第36-37页 |
·BZW2原核表达的蛋白免疫兔子制备多克隆抗体 | 第37页 |
·Western blot免疫印迹检测抗体效价 | 第37页 |
·免疫共沉淀(CO-IP) | 第37-38页 |
·荧光报告系统分析 | 第38-39页 |
·亚细胞定位分析 | 第39页 |
·提取蛋白质 | 第39页 |
·蛋白质印迹免疫检测(Western-blot) | 第39-41页 |
第三章 实验结果及其分析 | 第41-60页 |
·人类DNAJB6基因的生物信息学分析结果 | 第41-42页 |
·人类SLC25A3基因的生物信息学分析结果 | 第42-44页 |
·TRIM45蛋白与DNAJB6蛋白在体内发生相互作用 | 第44-45页 |
·TRIM45蛋白与SLC25A3蛋白在体内发生相互作用 | 第45页 |
·TRIM45、DNAJB6、SLC25A3基因对心脏标志基因NFAT等的转录活性调控研究 | 第45-48页 |
·TRIM45基因的拆片抑制NF-KB的转录活性 | 第48-50页 |
·人类BZW2基因的生物信息学分析结果 | 第50-52页 |
·BZW2开放阅读框(ORF)的克隆 | 第52-53页 |
·BZW2的亚细胞定位分析 | 第53-54页 |
·pGEX-4T-1-BZW2重组质粒的构建 | 第54-56页 |
·BZW2融合蛋白表达 | 第56页 |
·BZW2兔多克隆抗体制备和效价检测 | 第56-57页 |
·BZW2蛋白在心脏,肌肉,脑组织中高表达 | 第57-58页 |
·BZW2的相互作用蛋白预测分析 | 第58-59页 |
·BZW2抑制NF-KB和NFAT的转录活性 | 第59-60页 |
第四章 结语 | 第60-62页 |
第五章 其他工作—LRRC39基因在肌原分化中的作用 | 第62-64页 |
参考文献 | 第64-71页 |
附录1 | 第71-72页 |
附录2 | 第72-73页 |
致谢 | 第73-74页 |