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稳定表达萤火虫荧光素酶报告基因的猪瘟病毒的构建及其在抗病毒试验中的应用

中国农业科学院硕士学位论文评阅人、答辩委员会签名表第1-6页
摘要第6-7页
Abstract第7-10页
英文縮略表第10-11页
第一章 引言第11-19页
   ·猪瘟及猪瘟病毒第11-12页
     ·猪瘟第11页
     ·猪瘟病毒第11-12页
   ·猪瘟的预防和控制第12页
   ·CSFV的生命周期第12-15页
     ·CSFV的吸附与穿入第13页
     ·CSFV多聚蛋白的合成第13-14页
     ·CSFV基因组的复制第14页
     ·CSFV的装配第14-15页
     ·CSFV的释放第15页
   ·猪瘟病毒的细胞培养第15页
   ·猪瘟病毒的反向遗传学操作第15-16页
     ·猪瘟病毒全长感染性克隆的构建第16页
     ·携带标记基因的重组猪瘟病毒的拯救及研究概况第16页
   ·荧光素酶的种类第16-17页
   ·荧光素酶的应用第17-18页
     ·作为报告基因的检测系统第17页
     ·用于RNA干扰分析第17页
     ·蛋白质相互作用的研究第17-18页
     ·活体细胞成像研究第18页
   ·研究背景与目的第18-19页
第二章 稳定表达萤火虫荧光素酶报告基因的猪瘟病毒的构建及其在抗病毒试验中的应用第19-35页
   ·材料和方法第19-24页
     ·病毒、细胞、质粒、抗体和试剂第19页
     ·主要仪器设备第19页
     ·携带Fluc基因的全长感染性克隆的构建第19-20页
     ·报告病毒的拯救第20-21页
     ·报告病毒荧光定量PCR检测第21页
     ·报告病毒抗原ELISA检测第21-22页
     ·报告病毒测序验证第22页
     ·报告病毒的RT-PCR检测第22页
     ·间接免疫荧光试验(IFA)第22页
     ·报告病毒在SK6细胞上生长曲线的测定第22-23页
     ·N~(pro)蛋白质免疫印迹分析第23页
     ·萤火虫荧光素酶分析第23页
     ·基于萤火虫荧光素酶活性的中和试验第23页
     ·报告病毒用于RNA干扰试验第23-24页
     ·统计学分析第24页
   ·结果第24-33页
     ·全长感染性克隆pBRCISM-N~(pro)Fluc酶切鉴定结果第24-25页
     ·报告病毒E~(ms)抗原、RT-PCR和荧光定量PCR检测结果第25-27页
     ·重组猪瘟病毒C SFV-N~(pro)Fluc的生长曲线及生物学特性分析第27-29页
     ·CSFV-N~(pro)Fluc的遗传稳定性第29-30页
     ·CSFV-Fluc-NT和IDEXX-ELISA的相关性第30-31页
     ·报告病毒用于抗CSFV siRNA的筛选第31-33页
   ·讨论第33-35页
第三章 全文结论第35-36页
参考文献第36-41页
致谢第41-42页
作者简历第42页

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