| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 研究背景 | 第11-25页 |
| 1 水稻条纹叶枯病的研究现状 | 第11-13页 |
| ·发生及危害 | 第11页 |
| ·症状表现 | 第11-12页 |
| ·病害传播途径 | 第12页 |
| ·防治策略 | 第12-13页 |
| ·控制传毒介体灰飞虱的传播 | 第12页 |
| ·控制 RSV 的侵染和传播 | 第12-13页 |
| ·抗病性水稻的选育 | 第13页 |
| 2 植物内源抗病毒 WRKY 蛋白概述 | 第13-16页 |
| ·WRKY 蛋白的发现及分类 | 第13-15页 |
| ·植物内源 WRKY 蛋白的功能 | 第15-16页 |
| ·调控生物逆境抗性 | 第15页 |
| ·调控非生物逆境代谢反应 | 第15页 |
| ·内源抗病毒 WRKY21、WRKY70 蛋白研究进展 | 第15-16页 |
| 3 本实验用到的技术 | 第16-24页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第16-21页 |
| ·qPCR | 第16页 |
| ·qPCR 原理 | 第16-17页 |
| ·qPCR 的主要技术 | 第17-18页 |
| ·荧光染料法 | 第17页 |
| ·荧光探针法 | 第17-18页 |
| ·qPCR 的定量方法 | 第18-19页 |
| ·qPCR 的应用领域 | 第19-21页 |
| ·RNA 干扰（RNA interference , RNAi）技术 | 第21-23页 |
| ·RNAi 的发现 | 第21页 |
| ·RNAi 原理 | 第21-22页 |
| ·siRNA 诱导的 RNAi | 第22-23页 |
| ·siRNA 和 miRNA | 第22页 |
| ·siRNA 介导的 RNAi 在植物抗病毒中的研究 | 第22-23页 |
| ·siRNA 介导的 RNAi 在水稻抗病毒中的研究 | 第23页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化技术 | 第23-24页 |
| 4 本实验的研究目的及意义 | 第24-25页 |
| 第二章 水稻内源 WRKY21、WRKY70 蛋白 mRNA 的表达情况 | 第25-41页 |
| 摘要 | 第25页 |
| 1 材料与方法 | 第25-32页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·供试材料 | 第25-26页 |
| ·主要试剂 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-32页 |
| ·qPCR 引物的设计 | 第26页 |
| ·RNA 的抽提和纯化 | 第26-27页 |
| ·cDNA 的合成 | 第27-28页 |
| ·制作标准品和标准曲线 | 第28-32页 |
| ·标准品的获得 | 第28-31页 |
| ·建立标准曲线 | 第31-32页 |
| ·qPCR 检测基因的表达量 | 第32页 |
| 2 结果与分析 | 第32-40页 |
| ·总 RNA 的纯度检测 | 第32-33页 |
| ·引物特异性检测 | 第33-34页 |
| ·调控蛋白基因和内参基因的融解曲线 | 第34-35页 |
| ·调控蛋白基因和内参基因的扩增曲线 | 第35-37页 |
| ·调控蛋白基因和内参基因的标准曲线 | 第37-39页 |
| ·水稻内源 WRKY21 蛋白、WRKY70 蛋白基因表达量 | 第39-40页 |
| 3 小结与讨论 | 第40-41页 |
| 第三章 过表达 WRKY 蛋白植株的获得和抗病毒分析 | 第41-55页 |
| 摘要 | 第41页 |
| 1 材料与方法 | 第41-47页 |
| ·材料 | 第41页 |
| ·供试水稻 | 第41页 |
| ·酶及试剂 | 第41页 |
| ·方法 | 第41-47页 |
| ·转基因水稻植株的潮霉素抗性筛选 | 第41-42页 |
| ·T0代转化植株的 PCR 阳性检测 | 第42页 |
| ·CTAB 法提取水稻叶片总 DNA | 第42页 |
| ·总 DNA 的抽提纯化 | 第42-43页 |
| ·Southern blot 检测 | 第43-45页 |
| ·DNA 探针的标记 | 第43-44页 |
| ·酶切、转膜和固定 | 第44页 |
| ·预杂交和杂交 | 第44-45页 |
| ·显色 | 第45页 |
| ·水稻培养 | 第45页 |
| ·灰飞虱的饲养 | 第45页 |
| ·带毒率的检测 | 第45-46页 |
| ·Trizol 法提取灰飞虱总 RNA | 第46页 |
| ·One-Step RT-PCR | 第46页 |
| ·传毒实验 | 第46-47页 |
| ·抗病毒分析 | 第47页 |
| 2 结果与分析 | 第47-54页 |
| ·转基因水稻的分子检测 | 第47-51页 |
| ·转基因水稻植株的潮霉素抗性筛选 | 第47-48页 |
| ·T0代、T1代转化植株的 PCR 阳性检测 | 第48-49页 |
| ·Southern 杂交分析 | 第49-51页 |
| ·水稻内源蛋白的抗病毒分析 | 第51-54页 |
| ·传毒实验 | 第51-52页 |
| ·抗病毒分析 | 第52-54页 |
| 3 小结与讨论 | 第54-55页 |
| 第四章 内源抗病毒蛋白 RNAi 植株培育 | 第55-66页 |
| 摘要 | 第55-56页 |
| 1 材料与方法 | 第56-60页 |
| ·材料 | 第56页 |
| ·方法 | 第56-60页 |
| ·RNAi 表达载体的构建 | 第56-57页 |
| ·RNAi 目标片段选择及引物设计 | 第56页 |
| ·PCR 扩增、电泳及回收 | 第56-57页 |
| ·转化、鉴定 | 第57页 |
| ·反向链接并转化大肠杆菌鉴定 | 第57页 |
| ·阳性克隆筛选及酶切 | 第57页 |
| ·RNAi 表达载体的农杆菌转化 | 第57-60页 |
| ·转化农杆菌 | 第57-58页 |
| ·筛选单克隆 | 第58页 |
| ·农杆菌介导法获得转基因植株 | 第58-60页 |
| ·阳性植株鉴定 | 第60页 |
| 2 结果与分析 | 第60-65页 |
| ·内源抗病毒蛋白 RNAi 植株的获得 | 第60-63页 |
| ·目的片段的获得 | 第60-61页 |
| ·阳性克隆检测及测序分析 | 第61页 |
| ·酶切鉴定 | 第61-62页 |
| ·阳性克隆筛选及酶切分析 | 第62-63页 |
| ·农杆菌介导的水稻遗传转化 | 第63-64页 |
| ·农杆菌阳性克隆筛选 | 第63-64页 |
| ·转基因植株的获得 | 第64页 |
| ·转基因植株的鉴定 | 第64-65页 |
| 3 小结与讨论 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-73页 |
| 致谢 | 第73页 |
