| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-18页 |
| 第一章 文献综述 | 第18-43页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌简介 | 第19-23页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌的生物学特性 | 第19-21页 |
| ·食品中的单核细胞增生李斯特菌 | 第21页 |
| ·食品中单核细胞增生李斯特菌的控制手段 | 第21-23页 |
| ·菌膜 | 第23-36页 |
| ·菌膜的定义 | 第23-24页 |
| ·菌膜的成分 | 第24-26页 |
| ·菌膜的结构 | 第26页 |
| ·菌膜的分布 | 第26-27页 |
| ·菌膜的作用 | 第27-28页 |
| ·研究菌膜的意义 | 第28-29页 |
| ·菌膜的检测方法 | 第29-31页 |
| ·菌膜形成相关基因的研究进展 | 第31-36页 |
| ·胁迫环境与单核细胞增生李斯特菌菌膜 | 第36-41页 |
| ·胁迫环境 | 第36-37页 |
| ·影响菌膜形成的胁迫条件 | 第37-39页 |
| ·菌膜的抗胁迫机制 | 第39-41页 |
| ·研究的意义、目的及思路 | 第41-43页 |
| 第二章 菌膜形成突变株中失活靶基因的鉴定及功能验证 | 第43-82页 |
| ·材料和方法 | 第43-63页 |
| ·菌株和质粒 | 第43-44页 |
| ·主要试剂及其配制 | 第44-46页 |
| ·主要仪器设备 | 第46-47页 |
| ·大肠杆菌中的质粒提取与纯化 | 第47页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌总 DNA 的提取 | 第47-48页 |
| ·反向 PCR 鉴定转座子 Tn917 的插入位点 | 第48-51页 |
| ·反向 PCR 产物的 pMD19-T 载体连接克隆 | 第51页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌感受态细胞 | 第51-52页 |
| ·阳性克隆的 PCR 及测序鉴定 | 第52-53页 |
| ·Southern 印迹杂交 | 第53-56页 |
| ·同源重组片段引物设计及扩增 | 第56页 |
| ·同源重组质粒 pMD19-GBX 的构建 | 第56-57页 |
| ·同源重组质粒 pKSV7-GBX 的构建 | 第57页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌感受态细胞的制备 | 第57-58页 |
| ·质粒 pKSV7-GBX 电转化菌膜突变株感受态细胞 | 第58页 |
| ·含有 pKSV7-GBX 阳性转化子的鉴定 | 第58页 |
| ·阳性转化子菌落 PCR | 第58-59页 |
| ·回复突变株 GBRX 的筛选 | 第59-60页 |
| ·96 孔平板法测定菌膜形成 | 第60-61页 |
| ·荧光显微镜观察菌膜形成 | 第61页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌总 RNA 的提取、纯化和 cDNA 的合成 | 第61-62页 |
| ·回复突变株的 PCR 验证 | 第62页 |
| ·荧光定量 PCR 检测失活靶基因旁侧序列 | 第62-63页 |
| ·结果与分析 | 第63-80页 |
| ·转座子 Tn917 上酶切位点的分析 | 第63-64页 |
| ·反向 PCR 识别转座子 Tn917 在菌膜突变株中的插入位点 | 第64-67页 |
| ·反向 PCR 产物测序及分析 | 第67-71页 |
| ·Southern 杂交检测 Tn917 在突变株中的拷贝数 | 第71-72页 |
| ·回复突变株同源重组质粒 pKSV7-GBX 的构建 | 第72-73页 |
| ·回复突变株的构建 | 第73-76页 |
| ·回复突变株的表型鉴定 | 第76-78页 |
| ·失活靶基因的生物信息学分析 | 第78-79页 |
| ·转座子 Tn917 插入失活靶基因相邻基因分析及其转录水平 | 第79-80页 |
| ·讨论与小结 | 第80-82页 |
| 第三章 转座子插入突变株与野生亲本的抗胁迫能力比较 | 第82-95页 |
| ·材料和方法 | 第82-85页 |
| ·菌株和质粒 | 第82页 |
| ·培养基及配制 | 第82-83页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌的生长曲线测定 | 第83页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌的运动能力测定 | 第83-84页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌的诱导裂解 | 第84页 |
| ·酸胁迫环境对单核细胞增生李斯特菌生长的影响 | 第84-85页 |
| ·渗透压对单核细胞增生李斯特菌生长的影响 | 第85页 |
| ·氧胁迫环境对单核细胞增生李斯特菌的影响 | 第85页 |
| ·结果与分析 | 第85-93页 |
| ·菌膜形成突变株与野生亲本的生长速率比较 | 第85-87页 |
| ·菌膜形成突变株与野生亲本的细胞运动性比较 | 第87-88页 |
| ·菌膜形成突变株与野生亲本的细胞自溶比较 | 第88-89页 |
| ·菌膜形成突变株与野生亲本的抗酸胁迫能力比较 | 第89-91页 |
| ·菌膜形成突变株与野生亲本的耐盐性比较 | 第91-92页 |
| ·菌膜形成突变株与野生亲本的抗氧胁迫能力比较 | 第92-93页 |
| ·讨论与小结 | 第93-95页 |
| 第四章 基因缺失突变株△gltB 和△gltC 的构建及其在抗氧胁迫和菌膜形成中的调控途径分析 | 第95-117页 |
| ·材料和方法 | 第95-104页 |
| ·菌株和质粒 | 第95页 |
| ·培养基及配制 | 第95-96页 |
| ·引物设计及 lm.G_1758 基因缺失突变株△gltB 的构建 | 第96-98页 |
| ·引物设计及 lm.G_1759 基因缺失突变株△gltC 的构建 | 第98页 |
| ·碟片法测试基因缺失突变株抗氧胁迫能力 | 第98-99页 |
| ·液体培养基中单核细胞增生李斯特菌抗氧胁迫能力的测定 | 第99-100页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌过氧化氢酶活的测定 | 第100页 |
| ·荧光定量 PCR 检测相关抗氧胁迫基因表达 | 第100-101页 |
| ·基因缺失突变株初始粘附率的测定 | 第101-103页 |
| ·基因缺失突变株菌膜形成能力的测定 | 第103页 |
| ·消毒剂抗性实验 | 第103页 |
| ·基因缺失突变株运动性测定 | 第103-104页 |
| ·互补菌株的构建 | 第104页 |
| ·结果和分析 | 第104-115页 |
| ·同源重组质粒的 pAUL-gltB 和 pAUL-gltC 构建流程 | 第104-106页 |
| ·同源重组质粒 pAUL-gltB 和 pAUL-gltC 的构建及鉴定 | 第106页 |
| ·基因缺失突变株△gltB 和△gltC 的构建 | 第106-107页 |
| ·回复突变株 GBR5 和功能互补突变株△gltC-C 的构建及验证 | 第107-108页 |
| ·△gltB 和△gltC 抗氧胁迫能力测定 | 第108-110页 |
| ·基因 gltB 和 gltC 在不同环境中的转录水平测定 | 第110页 |
| ·△gltB 和△gltC 菌膜形成能力测定 | 第110-111页 |
| ·△gltB 和△gltC 初始粘附率测定 | 第111-113页 |
| ·△gltB 和△gltC 对多种消毒剂的抗性测定 | 第113页 |
| ·调控子编码基因 gltC 对菌膜形成和抗氧胁迫的调控途径分析 | 第113-115页 |
| ·讨论与小结 | 第115-117页 |
| 第五章 单核细胞增生李斯特菌中菌膜形成及抗氧胁迫相关基因的筛选与分析 | 第117-138页 |
| ·材料和方法 | 第117-120页 |
| ·菌株和质粒 | 第117-118页 |
| ·培养基及配制 | 第118页 |
| ·生长曲线测定（20 天） | 第118页 |
| ·不同血清型菌株菌膜形成能力测定 | 第118页 |
| ·不同血清型菌株抗氧胁迫能力测定 | 第118-119页 |
| ·不同血清型菌株过氧化氢酶活性测定 | 第119页 |
| ·抗氧胁迫能力与菌膜形成能力相关性分析 | 第119-120页 |
| ·荧光定量 PCR 测定氧胁迫相关基因在不同血清型菌株中的转录表达 | 第120页 |
| ·结果和分析 | 第120-136页 |
| ·不同血清型菌株在 20 天内的生长能力比较 | 第120-125页 |
| ·不同血清型菌株菌膜形成能力的比较 | 第125-127页 |
| ·不同血清型菌株抗氧胁迫能力的比较 | 第127-129页 |
| ·不同血清型菌株过氧化氢酶活性的比较 | 第129页 |
| ·单核细胞增生李斯特菌中抗氧胁迫能力与菌膜形成能力相关性分析 | 第129-133页 |
| ·不同血清型菌株中氧胁迫相关基因的表达情况比较 | 第133-136页 |
| ·讨论与小结 | 第136-138页 |
| 第六章 结论与展望 | 第138-140页 |
| ·主要结论 | 第138页 |
| ·特色与创新 | 第138-139页 |
| ·展望 | 第139-140页 |
| 参考文献 | 第140-154页 |
| 附录 | 第154-161页 |
| 附录 1 | 第154-157页 |
| 附录 2 | 第157-161页 |
| 致谢 | 第161-163页 |
| 攻读学位期间已发表和准备中的学术论文 | 第163页 |
| 会议摘要 | 第163-165页 |
