冰城链霉菌属间接转移体系及南昌霉素中断菌株的构建
| 摘要 | 第1-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 引言 | 第11-21页 |
| ·链霉菌概述 | 第11-14页 |
| ·链霉菌简介 | 第11-12页 |
| ·冰城链霉菌简介 | 第12-13页 |
| ·米尔贝霉素简介 | 第13-14页 |
| ·南昌霉素简介 | 第14-15页 |
| ·聚酮合酶PKS简介 | 第15-17页 |
| ·南昌霉素PKS基因簇简介 | 第16-17页 |
| ·链霉菌基因转移的主要方法 | 第17-19页 |
| ·研究目的和实验内容 | 第19-21页 |
| ·研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| ·课题来源和研究内容 | 第20-21页 |
| 2 实验材料和仪器 | 第21-26页 |
| ·菌种 | 第21页 |
| ·质粒 | 第21-22页 |
| ·主要生化试剂 | 第22页 |
| ·培养基及溶液 | 第22-24页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·溶液 | 第23-24页 |
| ·主要仪器 | 第24-26页 |
| 3 实验方法 | 第26-33页 |
| ·冰城链霉菌的基本操作 | 第26-27页 |
| ·菌种的培养与保藏 | 第26页 |
| ·链霉菌孢子悬液制备 | 第26页 |
| ·冰城链霉菌菌丝体提取 | 第26-27页 |
| ·冰城链霉菌总DNA的提取方法 | 第27页 |
| ·南昌霉素中断质粒的构建 | 第27-31页 |
| ·引物的设计与合成 | 第27页 |
| ·PCR反应体系 | 第27-28页 |
| ·PCR扩增产物的凝胶电泳 | 第28页 |
| ·PCR产物的纯化 | 第28-29页 |
| ·PCR产物与克隆载体的酶切 | 第29页 |
| ·目的基因与克隆载体的连接 | 第29-30页 |
| ·DH5α感受态细胞的制备 | 第30页 |
| ·连接产物的转化 | 第30-31页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第31页 |
| ·大肠杆菌和链霉菌的属间接合转移 | 第31-33页 |
| 4 结果与分析 | 第33-51页 |
| ·冰城链霉菌属间结合转移条件的前期探索 | 第33-35页 |
| ·温度对孢子萌发的影响 | 第33页 |
| ·接合转移培养基的选择 | 第33页 |
| ·接合转移培养基中MgCl_2浓度的选择 | 第33-34页 |
| ·孢子预萌发时间的选择 | 第34页 |
| ·供体和受体比例的选择 | 第34页 |
| ·抗生素覆盖时间的选择 | 第34-35页 |
| ·南昌霉素中断质粒的构建 | 第35-49页 |
| ·冰城链霉菌总DNA的提取检测 | 第36页 |
| ·质粒pBC2325的构建 | 第36-38页 |
| ·质粒pBC1066的构建 | 第38-42页 |
| ·质粒pBC1797的构建 | 第42-45页 |
| ·质粒pBC5188的构建 | 第45-49页 |
| ·接合转移 | 第49-51页 |
| ·大场杆菌ET12567与冰城链霉菌的接合转移 | 第49页 |
| ·筛选双交换菌株 | 第49-51页 |
| 5 讨论 | 第51-54页 |
| ·大肠杆菌-冰城链霉菌属间接合转移体系 | 第51页 |
| ·接合转移质粒的选择 | 第51-52页 |
| ·接合转移操作时应注意的因素 | 第52页 |
| ·菌丝体的属间接合转移 | 第52页 |
| ·南昌霉素中断载体的构建 | 第52-54页 |
| 6 结论 | 第54-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第62页 |
