| 摘要 | 第1-14页 |
| Abstract | 第14-17页 |
| 第一章 引言 | 第17-44页 |
| 1 双生病毒的研究概况 | 第17-40页 |
| ·双生病毒的危害 | 第17页 |
| ·双生病毒的结构特征与分类 | 第17-26页 |
| ·Begomoviruses 的病害复合体 | 第26-29页 |
| ·双生病毒的侵染过程 | 第29-33页 |
| ·双生病毒的致病因子 | 第33-34页 |
| ·双生病毒的变异与进化 | 第34-39页 |
| ·双生病毒的检测方法 | 第39-40页 |
| 2 酵母双杂交系统在双生病毒研究中的应用 | 第40-44页 |
| ·酵母双杂交系统 | 第40-41页 |
| ·酵母双杂交系统在双生病毒研究中的应用 | 第41-43页 |
| ·立题依据 | 第43-44页 |
| 第二章 材料与方法 | 第44-52页 |
| 1 材料 | 第44页 |
| ·毒源 | 第44页 |
| ·供试昆虫及植物材料 | 第44页 |
| ·菌株和质粒 | 第44页 |
| ·试剂 | 第44页 |
| ·常用缓冲液的配制 | 第44页 |
| 2 方法 | 第44-52页 |
| ·PCR 技术 | 第44-45页 |
| ·RCA 技术 | 第45页 |
| ·PCR 产物纯化 | 第45-46页 |
| ·DNA 克隆技术 | 第46-48页 |
| ·重组质粒的提取与鉴定 | 第48-50页 |
| ·侵染性克隆的转化 | 第50页 |
| ·农杆菌接种 | 第50-52页 |
| 第三章 侵染烟草的苎麻花叶病毒的分子鉴定及致病性测定 | 第52-67页 |
| 1 材料和方法 | 第52-56页 |
| ·毒源及植物总DNA 提取 | 第52页 |
| ·DNA-A 全长基因组的PCR 扩增、克隆及序列测定 | 第52-53页 |
| ·DNA-B 全长基因组的 PCR 扩增、克隆及序列测定 | 第53页 |
| ·序列分析 | 第53-54页 |
| ·侵染性克隆构建 | 第54-56页 |
| ·农杆菌介导的植株接种 | 第56页 |
| ·粉虱传毒实验 | 第56页 |
| ·病毒DNA 的检测 | 第56页 |
| 2 结果和分析 | 第56-64页 |
| ·病毒基因组的检测结果 | 第56-57页 |
| ·病毒基因组DNA-A 的结构特征及进化分析 | 第57-61页 |
| ·病毒基因组DNA-B 的结构特征 | 第61页 |
| ·侵染性克隆构建结果 | 第61-63页 |
| ·RaMoV-F3 DNA-A 和 DNA-B 的致病性测定 | 第63-64页 |
| ·虫传实验 | 第64页 |
| 3 小结与讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 烟草曲叶病害复合体的分子鉴定 | 第67-80页 |
| 1 材料和方法 | 第67-71页 |
| ·毒源及植物总DNA 提取 | 第67页 |
| ·DNA-A 全长基因组的PCR 扩增、克隆及序列测定 | 第67-68页 |
| ·DNA-B 的检测 | 第68页 |
| ·DNAβ全长基因组的PCR 扩增、克隆及序列测定 | 第68-69页 |
| ·序列分析 | 第69-71页 |
| ·粉虱传毒试验 | 第71页 |
| ·病毒DNA 的检测 | 第71页 |
| 2 结果和分析 | 第71-78页 |
| ·病毒基因组的检测结果 | 第71页 |
| ·PaLCuGuV DNA-A 的结构特征及进化分析 | 第71-72页 |
| ·AYVV DNA-A 的结构特征及进化分析 | 第72-75页 |
| ·卫星DNAβ的结构特征及进化分析 | 第75-77页 |
| ·虫传实验 | 第77-78页 |
| 3 小结与讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 番薯曲叶病毒的分子鉴定及致病性测定 | 第80-91页 |
| 1 材料和方法 | 第80-84页 |
| ·毒源及植物总DNA 提取 | 第80页 |
| ·DNA-A 全长基因组的扩增、克隆及序列测定 | 第80页 |
| ·DNA-B、DNAβ的检测 | 第80-81页 |
| ·序列分析 | 第81-83页 |
| ·侵染性克隆构建的策略 | 第83-84页 |
| ·农杆菌介导的植株接种 | 第84页 |
| ·病毒DNA 的检测 | 第84页 |
| 2 结果和分析 | 第84-89页 |
| ·病毒基因组DNA-A 的结构特征及进化分析 | 第84-87页 |
| ·DNA-B、DNAβ的检测 | 第87-88页 |
| ·侵染性克隆构建 | 第88-89页 |
| ·SPLCV DNA-A 的致病性测定 | 第89页 |
| 3 小结与讨论 | 第89-91页 |
| 第六章 一点红黄脉病毒的分子鉴定及致病性测定 | 第91-107页 |
| 1 材料和方法 | 第91-96页 |
| ·毒源及植物总DNA 提取 | 第91-92页 |
| ·DNA-A 全长基因组的扩增、克隆及序列测定 | 第92页 |
| ·DNA-B 的检测 | 第92页 |
| ·DNAβ全长基因组的扩增、克隆及序列测定 | 第92页 |
| ·序列分析 | 第92-94页 |
| ·侵染性克隆构建策略 | 第94-96页 |
| ·农杆菌介导的植株接种 | 第96页 |
| ·病毒DNA 的检测 | 第96页 |
| 2 结果和分析 | 第96-105页 |
| ·病毒基因组DNA-A 的结构特征及进化分析 | 第96-100页 |
| ·DNA-B 的检测 | 第100页 |
| ·Fz1 分离物的 DNAβ 与其它双生病毒的比较 | 第100-102页 |
| ·侵染性克隆构建 | 第102-104页 |
| ·DNA-A 和DNAβ的致病性测定 | 第104-105页 |
| 3 小结与讨论 | 第105-107页 |
| 第七章 中国大青黄色花叶病毒的分子鉴定 | 第107-118页 |
| 1 材料和方法 | 第107-110页 |
| ·毒源及植物总DNA 提取 | 第107页 |
| ·DNA-A 全长基因组的PCR 扩增、克隆及序列测定 | 第107页 |
| ·DNA-B 全长基因组的扩增、克隆及序列测定 | 第107-108页 |
| ·序列分析 | 第108-109页 |
| ·侵染性克隆构建策略 | 第109-110页 |
| 2 结果和分析 | 第110-116页 |
| ·病毒基因组DNA-A、DNA-B 的检测 | 第110-111页 |
| ·病毒基因组DNA-A 的结构特征及进化分析 | 第111-113页 |
| ·病毒基因组DNA-B 的结构特征 | 第113-115页 |
| ·侵染性克隆构建 | 第115-116页 |
| 3 小结与讨论 | 第116-118页 |
| 第八章 RaMoV 八个功能基因酵母表达载体的构建 | 第118-123页 |
| 1 材料与方法 | 第118-119页 |
| ·毒源和植物总 DNA 提取 | 第118页 |
| ·菌株和质粒 | 第118-119页 |
| ·主要试剂 | 第119页 |
| ·PCR 扩增、克隆 | 第119页 |
| ·酵母表达载体的构建 | 第119页 |
| ·阳性克隆的测序鉴定 | 第119页 |
| 2 结果与分析 | 第119-123页 |
| ·RaMoV 八个功能基因的PCR 扩增 | 第119-120页 |
| ·重组酵母表达载体的鉴定 | 第120-121页 |
| ·阳性克隆的测序鉴定 | 第121-122页 |
| 3 小结与讨论 | 第122-123页 |
| 第九章 RaMoV NSP 蛋白自身及与其它功能蛋白之间的互作 | 第123-131页 |
| 1 材料与方法 | 第123-126页 |
| ·菌株和质粒 | 第123页 |
| ·主要试剂 | 第123页 |
| ·载体和菌株的验证 | 第123-124页 |
| ·AH109 感受态细胞的制备 | 第124页 |
| ·重组质粒转化酵母菌AH109 | 第124-125页 |
| ·重组质粒的自激活活性检测 | 第125页 |
| ·重组质粒对AH109 细胞毒性检测 | 第125页 |
| ·两重组质粒共转化AH109 | 第125-126页 |
| ·蛋白互作的检测 | 第126页 |
| 2 结果与分析 | 第126-129页 |
| ·载体与菌株的验证 | 第126-127页 |
| ·重组质粒对AH109 细胞毒性和自激活活性检测 | 第127-128页 |
| ·蛋白自身互作的检测 | 第128页 |
| ·蛋白两两互作的检测 | 第128-129页 |
| 3 小结与讨论 | 第129-131页 |
| 第十章 利用 RaMoV BV1 蛋白筛选本氏烟cDNA 文库 | 第131-144页 |
| 1 材料与方法 | 第131-138页 |
| ·菌株和质粒 | 第131页 |
| ·主要试剂 | 第131页 |
| ·PCR 引物 | 第131页 |
| ·文库质量测定 | 第131-133页 |
| ·重组质粒对 Y187 细胞毒性和自激活活性检测 | 第133页 |
| ·筛选文库方法的选择 | 第133-135页 |
| ·阳性克隆菌落的筛选 | 第135-136页 |
| ·阳性克隆酵母质粒的提取 | 第136-137页 |
| ·PCR 鉴定阳性克隆中文库质粒的cDNA 插入片段 | 第137页 |
| ·酵母质粒转化大肠杆菌DH5α及PCR 再鉴定 | 第137页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第137-138页 |
| 2 结果与分析 | 第138-142页 |
| ·文库的质量检测 | 第138页 |
| ·重组质粒对细胞毒性和自激活活性检测 | 第138-139页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第139-140页 |
| ·PCR 鉴定cDNA 插入片段 | 第140页 |
| ·阳性克隆的测序及分析 | 第140-142页 |
| 3 小结与讨论 | 第142-144页 |
| 全文小结 | 第144-145页 |
| 参考文献 | 第145-162页 |
| 附录1 缩略语及含义 | 第162-164页 |
| 附录2 所用主要仪器、试剂与缓冲液的配制 | 第164-174页 |
| 附录3 所用载体图谱 | 第174-176页 |
| 附录4 攻博期间发表的文章 | 第176-177页 |
| 致谢 | 第177页 |
