| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-7页 |
| 英文缩略名词对照表 | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一章 文献综述及选题目的意义 | 第12-22页 |
| 1. 鸡传染性支气管炎概述 | 第12-18页 |
| ·病原学 | 第12-13页 |
| ·基因组结构 | 第13-14页 |
| ·结构蛋白及其生物学功能 | 第14-16页 |
| ·IBV的流行病学 | 第16-18页 |
| 2. 鸡传染性支气管炎病毒核蛋白N研究进展 | 第18-20页 |
| ·N基因遗传学研究 | 第18页 |
| ·N蛋白结构研究进展 | 第18-19页 |
| ·N蛋白生物学功能 | 第19页 |
| ·N蛋白抗原表位研究 | 第19-20页 |
| 3. IBV单克隆抗体的制备及应用研究进展 | 第20-21页 |
| ·IBV单克隆抗体研究进展 | 第20页 |
| ·IBV单克隆抗体的应用 | 第20-21页 |
| 4. 选题目的意义 | 第21-22页 |
| 第二章 鸡传染性支气管炎病毒重组N蛋白制备与抗原性检测 | 第22-37页 |
| 1. 材料和方法 | 第22-31页 |
| ·材料 | 第22页 |
| ·主要试剂 | 第22页 |
| ·试验仪器 | 第22页 |
| ·常用试剂配制 | 第22-24页 |
| ·IBVN蛋白基因扩增与克隆 | 第24-28页 |
| ·病毒的制备 | 第24页 |
| ·病毒RNA提取 | 第24-25页 |
| ·PCR扩增N蛋白基因 | 第25-26页 |
| ·N蛋白基因的TA克隆 | 第26页 |
| ·连接产物的转化 | 第26-27页 |
| ·重组质粒的筛选和鉴定 | 第27-28页 |
| ·N蛋白表达载体的构建 | 第28-29页 |
| ·带粘性末端N蛋白基因和载体pET-32a(+)的制备 | 第28-29页 |
| ·连接及转化 | 第29页 |
| ·重组表达质粒的酶切鉴定 | 第29页 |
| ·重组N蛋白的表达、纯化及抗原性鉴定 | 第29-31页 |
| ·N蛋白基因的诱导表达及鉴定 | 第29-30页 |
| ·表达条件的筛选优化 | 第30页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第30-31页 |
| ·重组蛋白Western Blot分析 | 第31页 |
| 2. 结果 | 第31-35页 |
| ·N基因的扩增与克隆 | 第31-32页 |
| ·N基因生物信息学分析 | 第31-32页 |
| ·N蛋白基因RT-PCR结果 | 第32页 |
| ·重组质粒pMD19-T-N的鉴定 | 第32页 |
| ·N蛋白表达载体的构建 | 第32-33页 |
| ·重组N蛋白的表达、纯化及抗原性检测结果 | 第33-35页 |
| ·重组N蛋白表达产物SDS-PAGE鉴定结果 | 第33-34页 |
| ·表达条件的筛选结果 | 第34页 |
| ·重组蛋白的纯化效果鉴定 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白Western Blot分析结果 | 第35页 |
| 3. 讨论 | 第35-37页 |
| 第三章 鸡传染性支气管炎病毒N蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 | 第37-55页 |
| 1. 材料和方法 | 第37-45页 |
| ·材料 | 第37页 |
| ·主要试剂 | 第37页 |
| ·试验仪器 | 第37页 |
| ·常用试剂配制 | 第37-38页 |
| ·动物免疫 | 第38-39页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第39-40页 |
| ·最佳抗原抗体工作浓度的确定 | 第39-40页 |
| ·阴阳性临界值确定 | 第40页 |
| ·单克隆抗体的制备 | 第40-43页 |
| ·免疫BALB/c小鼠血清效价测定 | 第40页 |
| ·细胞制备 | 第40-41页 |
| ·细胞融合 | 第41页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的筛选 | 第41-42页 |
| ·杂交瘤细胞的亚克隆 | 第42页 |
| ·阳性杂交瘤细胞冻存与复苏 | 第42-43页 |
| ·单克隆抗体腹水的制备 | 第43页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第43页 |
| ·杂交瘤细胞及单克隆抗体特性的鉴定 | 第43-45页 |
| ·杂交瘤细胞培养上清和腹水抗体的ELISA效价测定 | 第43-44页 |
| ·抗体亚型鉴定 | 第44页 |
| ·Western blot分析 | 第44页 |
| ·交叉反应性鉴定 | 第44页 |
| ·杂交瘤细胞系的稳定性测定 | 第44-45页 |
| 2. 结果 | 第45-51页 |
| ·间接ELISA方法的建立 | 第45-46页 |
| ·抗原抗体工作浓度的确定 | 第45页 |
| ·阴阳临界值的确定 | 第45-46页 |
| ·免疫BALB/C小鼠血清效价测定 | 第46页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第46-49页 |
| ·饲养细胞、SP2/0细胞及脾细胞的制备 | 第46-47页 |
| ·细胞融合 | 第47-48页 |
| ·杂交瘤细胞的亚克隆 | 第48页 |
| ·单克隆抗体的大量制备 | 第48页 |
| ·单克隆抗体的纯化 | 第48-49页 |
| ·杂交瘤细胞及单克隆抗体特性鉴定 | 第49-51页 |
| ·杂交瘤细胞培养上清和腹水抗体的ELISA效价测定 | 第49页 |
| ·抗体亚型鉴定 | 第49-50页 |
| ·Western blot分析结果 | 第50页 |
| ·交叉反应性鉴定 | 第50-51页 |
| ·杂交瘤细胞系的稳定性测定 | 第51页 |
| 3. 讨论 | 第51-55页 |
| ·动物免疫 | 第51-52页 |
| ·单克隆抗体的制备与鉴定 | 第52-55页 |
| 第四章 结论 | 第55-56页 |
| 参考文献 | 第56-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
